【摘 要】
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目的 观察Wnt3a转基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)对T淋巴细胞增殖的影响.方法 从C57BL/6小鼠骨髓中分离培养MSC,用流式细胞术检测细胞表面标志并在不同诱导条件下进行成骨和
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目的 观察Wnt3a转基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)对T淋巴细胞增殖的影响.方法 从C57BL/6小鼠骨髓中分离培养MSC,用流式细胞术检测细胞表面标志并在不同诱导条件下进行成骨和成脂分化鉴定；采用AdEasy系统将携带Wnt3a基因的重组质粒以脂质体法转染HEK293细胞,收集病毒液感染MSC,以含绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)作对照,荧光显微镜下观察GFP的表达,Western blot检测MSC中Wnt3a和β-catenin蛋白表达；制备BALB/c小鼠脾淋巴细胞悬液,Wnt3a转基因MSC、Ad-GFP转导MSC分别按1∶100、1∶50及1∶10比例和ConA刺激的脾淋巴细胞共培养,48 h后应用CCK-8法、ELISA法检测T淋巴细胞的相对增殖率和培养上清中细胞因子含量变化.结果成功获得MSC,细胞表型检测为CD44+、CD90.2+、CD34-、CD45-,诱导后可向成骨细胞、脂肪细胞分化；包装的腺病毒滴度达1×1010 pfu/ml,病毒液感染MSC后72 h GFP表达最强,感染效率为50％～60％.Western blot结果显示Wnt.3a转基因MSC中Wnt3a和β-catenin蛋白的表达水平明显增强；MSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,在MSC与脾淋巴细胞比例为1∶10时,Ad-GFP转导MSC组T淋巴细胞增殖率为(55.41±1.75)％,IFN-γ分泌量为(326.70±14.41)pg/ml；Wnt3a转基因MSC组T淋巴细胞增殖率为(37.27±2.66)％,IFN-γ分泌量为(218.80±12.93)pg/ml,但各组MSC对IL-2的分泌无明显影响.结论 Wnt3a转基因MSC较Ad-GFP转导的MSC抑制T淋巴细胞增殖的作用更显著.
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