【摘 要】
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目的建立体外培养和扩增胚胎干细胞R1(ES-R1)的最佳条件;利用多种生长因子,优化培养条件,体外定向诱导ES-R1分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。方法以丝裂霉索-C处理的MEF为饲养层
【机 构】
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哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室; 哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室 哈尔滨150086; 哈尔滨150086;
【基金项目】
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国家科技攻关计划资助项目(2004BA754C);黑龙江省科技计划资助项目(GA01C02);黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11511226)
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目的建立体外培养和扩增胚胎干细胞R1(ES-R1)的最佳条件;利用多种生长因子,优化培养条件,体外定向诱导ES-R1分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。方法以丝裂霉索-C处理的MEF为饲养层,培养液中加白血病抑制因子(LIF),ES-R1维持未分化状态并扩增,进行碱性磷酸酶染色。胚胎干细胞(ESCs)悬浮培养制成拟胚体(EBs),对培养至第4d的EBs开始定向诱导,依次加入无血清的ITS培养液,胰岛前体细胞增殖培养液和胰岛分化培养液,每种培养液内各培养6d,获得形态功能较成熟的IPCs。采用DTZ染色、免疫荧光染色、胰岛素刺激实验等方法对IPCs进行检测。结果ESCs在饲养层细胞上呈克隆状生长,经碱性磷酸酶染色为阳性;EBs经3种诱导液诱导成三维立体的IPCs,IPCs被DTZ染成猩红色,胰岛素和胰高血糖素阳性表达,胰岛素刺激实验阳性。结论ES-R1在体外培养时,用MEF做饲养层,培养液中添加一定浓度的LlF,可以最好地保持未分化状态并大量增殖。用分阶段添加不同生长因子的方法诱导ES-R1定向分化生成的IPCs在形态和功能上具有胰岛的特性。
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