【摘 要】
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目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室
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目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,WesternBlot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1:102400,抗体亲和常数为1.558×109L/mol,WesternBlotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。结论成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。
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