【摘 要】
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背景：研究表明，在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达，初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的：探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法：体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转
【基金项目】
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国家自然科学基金（82160176）,项目负责人：何苇； 遵义医科大学研究生科研基金立项项目（ZYK65）,项目负责人：冯文宣；
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背景：研究表明，在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达，初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的：探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法：体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为：（1）对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。（2）NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率；透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目；免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度；Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。（3）miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平；Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的蛋白表达。结果与结论：（1）过表达miR-135a-5p后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数量显著增多（P ＜0.01）;LC3B的荧光密度显著升高（P ＜0.01）,KIF3B、P62的蛋白表达降低（P ＜0.01）,LC3的蛋白表达升高；（2）过表达KIF3B后，细胞内自噬小体/自噬溶酶体数目明显减少（P ＜0.01）,LC3B的荧光密度降低（P ＜0.01）,P62的蛋白表达升高（P ＜0.01）,LC3的蛋白表达下降（P ＜0.01）;miR-135a-5p靶向抑制KIF3B的表达（P ＜0.01），并使自噬小体/自噬溶酶体数目、LC3B的荧光强度以及LC3的蛋白表达得到回升（P ＜0.01）,P62的蛋白表达下降（P ＜0.01）；（3）SAG使Gli3的mRNA表达明显升高（P ＜0.01）,P62的蛋白表达升高（P ＜0.01）,LC3的蛋白表达下降（P ＜0.01）；加入miR-135a-5p后，Gli3的mRNA表达显著下降（P ＜0.01）,P62的蛋白表达下降（P ＜0.01）,LC3的蛋白表达回升（P ＜0.01）；（4）结果表明：miR-135a-5p靶向抑制KIF3B并且可能通过负向调控Shh信号通路促进小鼠胚胎间充质细胞自噬。
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