【摘 要】
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目的:利用现代分子生物学方法,建立一种准确率更高的犬疥(璊)病的诊断方法,为犬疥(璊)病的治疗提供诊断基础.方法:收集犬疥(璊),抽提总RNA并将其反转录为cDNA;以该cDNA为模板
【机 构】
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河南牧业经济学院动物医学系,中国农业科学院上海兽医研究所
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目的:利用现代分子生物学方法,建立一种准确率更高的犬疥(璊)病的诊断方法,为犬疥(璊)病的治疗提供诊断基础.方法:收集犬疥(璊),抽提总RNA并将其反转录为cDNA;以该cDNA为模板,参考其它哺乳动物副肌球蛋白的基因序列特征,设计引物扩增含有多个抗原表位的犬副肌球蛋白的部分cDNA序列;构建原核表达载体,表达及纯化目的蛋白片段;以纯化的目的蛋白片段为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清;以制备的抗血清为一抗,通过间接ELISA法测定患病犬痂皮组织中疥(璊)副肌球蛋白片段的存在,进而判断是否有疥(璊)感染.结果:成功构建了副肌球蛋白的原核表达载体,命名为pET28a-Para-202;通过诱导、纯化获得了重组蛋白;该重组蛋白抗原免疫小鼠后获得高效价的抗血清;以该抗血清为工具,通过间接ELISA法极大提高了犬疥(璊)感染的诊断率,为该病治疗提供了重要的参考依据.
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