【摘 要】
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目的:研究健脾养正方重塑肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表型对胃癌细胞凋亡的影响及相关机制.方法:构建TAM细胞模型,流式细胞术检测健脾养正方对TAM表面CD86、CD163的表达;实时荧光定量PCR检测TAM中肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-10 mRNA水平;Western Blot法检测健脾养正方对TAM免疫检查点PI3Kγ及下游p-C/EBP-β、p-NF-кB的影响.MTT、流式细胞术、TUNEL及Western Blot法观察健脾养正方通过TAM对胃癌细胞
【机 构】
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南京中医药大学附属医院,江苏省中医医院,南京210029;南京中医药大学附属医院,江苏省中医医院,南京210029;南京中医药大学,南京210023;南京中医药大学,南京210023
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目的:研究健脾养正方重塑肿瘤相关巨噬细胞(TAM)表型对胃癌细胞凋亡的影响及相关机制.方法:构建TAM细胞模型,流式细胞术检测健脾养正方对TAM表面CD86、CD163的表达;实时荧光定量PCR检测TAM中肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-10 mRNA水平;Western Blot法检测健脾养正方对TAM免疫检查点PI3Kγ及下游p-C/EBP-β、p-NF-кB的影响.MTT、流式细胞术、TUNEL及Western Blot法观察健脾养正方通过TAM对胃癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.结果:健脾养正方可增加M1型表面蛋白CD86表达及TNF-α mRNA的表达(P＜0.05),减少M2型表面蛋白CD163表达及TGF-β、IL-10 mRNA的表达(P＜0.05),减少TAM中p-PI3Kγ及下游p-C/EBP-β的表达(P＜0.05),增加p-NF-κB的蛋白表达(P＜0.05).此外,健脾养正方可通过改变TAM表型减少胃癌细胞增殖,促进凋亡,增加Bax蛋白水平(P＜0.05),抑制Bcl-2蛋白水平(P＜0.05),下调Bcl-2/Bax蛋白比例(P＜0.05),上调Cleaved-caspase3/caspase3蛋白比例(P＜0.05).结论:健脾养正方通过下调TAM免疫检查点PI3Kγ的活性,调控下游p-C/EBP-β、p-NF-κB对炎症因子的释放,促进TAM从M2表型向M1表型转化,促进胃癌细胞凋亡.
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