【摘 要】
：
目的确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力。方法采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株。采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度(MIC)。采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因(stkP)胞外区(EC-S
【机 构】
：
325035 温州医科大学检验医学院、生命科学学院；310053 杭州医学院,325035 温州医科大学检验医学院、生命科学学院；310053 杭州医学院,325035 温州医科大学检验医学院、生命科
论文部分内容阅读
目的确定肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP与耐药相关性及其胞外区与β-内酰胺类抗生素结合的能力。
方法采用插入失活法构建肺炎链球菌ATCC6306株stkP基因敲除(ΔstkP)突变株。采用E-test检测青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)对Δstkp突变株及其野生株的最低抑菌浓度(MIC)。采用生物信息学软件确定肺炎链球菌ATCC6306株丝氨酸/苏氨酸激酶编码基因(stkP)胞外区(EC-StkP)、构建EC-StkP三维空间结构模型、分析EC-StkP结构与功能关系。采用PCR扩增stkP基因胞外区片段(EC-stkP)，T-A克隆后测序。构建EC-stkP原核表达系统，SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组蛋白(EC-rStkP)表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯EC-rStkP。采用等温滴定量热法(VT-ITC)和表面等离子共振法(Biacore)检测EC-rStkP与PCN和CTX结合能力。
结果肺炎链球菌ATCC6306株对PCN和CTX敏感(MIC＝0.06和0.12 μg/ml)，但ΔstkP突变株对PCN和CTX高度耐药(MIC＝16和32 μg/ml)。肺炎链球菌ATCC6306株StkP C端295 aa片段为胞外区，该胞外区有4个青霉素结合蛋白和丝氨酸/苏氨酸激酶相关(PASTA)功能结构域。克隆的stkP胞外区序列与GenBank中相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%和100%。构建的EC-stkP原核表达系统可表达可溶性EC-rStkP。PCN和CTX均能与EC-rStkP结合，但后者结合EC-rStkP能力强于前者。
结论肺炎链球菌stkP基因与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关，其表达产物丝氨酸/苏氨酸激酶StkP具有识别并结合β-内酰胺类抗生素的能力。
其他文献
摘要：〖HJ1.26mm〗网络海外代购属于电子商务的一个分支，在我国产生之后迅速受到消费者及经营者的追捧，产生了巨大的交易规模。网络海外代购同时存在着偷逃关税逃避海关监管的走私犯罪行为，给国家造成了巨额的税收损失。本文通过目前网络海外代购存在的主要问题，分析研究了网络海外代购走私犯罪的特点，最后提出网络海外代购中走私犯罪的打击防范对策。 关键词：网络；海外代购；走私犯罪；打击防范对策 中图分类
摘要：〖HJ1.3mm〗气温普遍变暖，海冰覆盖面积逐渐萎缩，海水温度不断走高等全球变暖带来的各种影响威胁着北极地区的生态环境，使得北极熊的生存环境面临危机。北极熊保护问题日益受到国际社会的广泛关注。现有北极熊保护的法律涉及诸多国际条约，全球性的国际公约有针对北极环境保护做出特别的规定，其中就会涉及北极熊的保护。而北极地区的区域性条约有针对北极熊保护方面做出的规定，但是大都以“软法”为主，并具有不成
2014年10月8日，中村修二在自己创立的发光二极管（ LED）创业企业SORAA公司召开记者会，表示希望通过普及该公司制造的紫色LED来降低能耗，以解决各种社会问题。紫色LED能以更少的能量
摘 要：小学语文成长课堂是从关注生命成长的角度来关注语文课堂的每一种成长元素，重构教育理念、师生关系、实践范式，并以此为基点构建出新型课堂来开展语文教学活动。由此可以充分说明，小学语文成长课堂教学符合新课程要求，值得广泛实施。基于此点，本文就如何在小学语文中实施“成长课堂”教学进行分析和探讨。 关键词：小学语文;成长课堂;教学研究;自主学习 课堂教学价值是不可忽视的，在小学语文教学中充分发挥课
目的了解人单核-巨噬细胞和中性粒细胞杀灭问号钩端螺旋体(简称钩体)能力差异及其机制。方法人THP-1单核细胞和HL-60细胞分别用佛波酯(PMA)和全反式维甲酸(ATRA)预处理，使其分化为单核-巨噬细胞和中性粒细胞。采用激光共聚焦显微镜法检测问号钩体黄疸出血群赖型赖株感染THP-1单核-巨噬细胞和HL-60中性粒细胞内总活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平和游离钙离子浓度([Ca2＋]i)变化
2014年12月8日，在瑞典斯德哥尔摩大学举行的诺贝尔奖纪念演讲上，中村修二表示，蓝色 LED 存在“光效下降”问题，越是高亮度，就越难提高效率。而激光器不存在这一问题，与LED 照明相比
摘要：〖HJ1.1mm〗刑事政策的渊源，是准确界定刑事政策范围的基础性问题，具有重要的理论与现实意义。本文从概念、主体、形式三个层面对其进行了探讨。 关键词：刑事政策；限定性 中图分类号：D914文献标识码：A文章编号：2095-4379-（2017）02-0051-02 一、刑事政策渊源的概念性限定 所谓刑事政策，最早由费尔巴哈于1803年在刑法教科书中予以使用，意为“国家据以与犯罪作斗
摘要：在4D打印技术下，能够在触媒条件下自组装变形的4D打印物会对专利侵权判定理论带来一定的影响。直接侵权判定理论和间接侵权判定理论的保护范围不能有效及于处在非侵权状态的4D打印物。通过立法修改权利要求书撰写方式以及对直接侵权判定理论进行扩大解释是两种可行的保护路径。利用税收归宿理论对上述两种保护路径分析后得出的结论是后者实现成本更低，并且达到效果相同，为优选路径。 关键词：4D打印；专利侵权判
关键词：高职；思想政治理论课；企业文化；意义 中图分类号：G711文献标识码：A文章编号：2095-4379-（2017）02-0059-02 思想政治理论课是高职大学生思想政治教育的主渠道，是高职院校对高职大学生进行社会主义核心价值观教育、帮助他们树立正确的世界观、人生观和价值观的重要途径，有利于培养他们成为社会主义事业的建设者和接班人。企业文化是企业在长期的生产经营活动中所形成的，是企业所
摘要：本文首先介绍了城市住宅建设用地使用权，选择其概念与特点两个视角入手加以分析，把这类土地的使用权和地上权加以对比分析。之后探讨了国内城市住宅建设用地使用权续期制度所具有的问题，涵盖了此类土地使用权期满国家无偿收回房屋存在不合理之处与自动续期操作性不足两块问题。最后，经过对于上述问题的探讨分析，给出了健全国内城市住宅建设用地使用权续期制度有关意见。 关键词：住宅建设用地；使用权；续期制度 中