探讨抑制Bcl－2基因表达对人肺癌A549细胞化疗药物杀伤敏感性及其相关基因mRNA表达的影响。为进一步提高非小细胞肺癌(NSCLC)化疗疗效提供实验依据。

构建靶向人Bcl－2基因的微小RNA重组质粒，并转染至A549细胞，设稳定转染的实验组、阴性对照质粒组和空白对照组，运用逆转录聚合酶链反应(RT－PCR)琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染细胞中Bcl－2 mRNA转录和蛋白的表达水平，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术分析转染后细胞的增殖和周期变化。MTT法检测干扰后A549细胞对依托泊苷、5－氟尿嘧啶、顺铂、阿霉素、长春新碱、紫杉醇及长春瑞滨等7种化疗药物敏感性的变化。应用RT－PCR及实时荧光定量PCR方法进行核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、胸腺嘧啶合成酶(TYMS)、Ⅲ型β－微管蛋白(Class Ⅲ β－tubulin)、拓扑异构酶2α(TOP2α)等化疗敏感性相关基因mRNA表达的检测。

成功构建微小RNA表达载体，稳定转染A549细胞后，实验组Bcl－2 mRNA表达(相对表达量为0.002±0.001)与阴性对照质粒组(相对表达量为0.104±0.003)相比下降98.1%，蛋白表达水平下调57.6%(t值分别为98.70和7.66，均P<0.05)。流式细胞术测定实验组细胞周期阻滞在G1期，MTT法检测示实验组细胞生长受到明显抑制，对依托泊苷、顺铂、紫杉醇、长春瑞滨等4种药物的敏感性明显增加[实验组IC₅₀分别为(107.3±0.1) mg/L、(7.7±0.6) mg/L、(11.5±1.9) mg/L和(10.8±1.6) mg/L，阴性对照质粒组IC₅₀分别为(145.8±0.1) mg/L、(60.7±1.4) mg/L、(80.6±1.7) mg/L和(20.6±1.7) mg/L]，差异均有统计学意义(t值分别为655.33, 108.04, 82.16和12.48，均P<0.05)。此外，Bcl－2表达下调还使实验组ERCC1、TYMS、TOP2α基因的mRNA转录下降，与阴性对照质粒组相比分别下调99.6%、92.9%、96.1%(t值分别为689.79，689.37和768.04，均P<0.05)，但实验组ClassⅢβ－tubulin基因mRNA转录(1.154±0.008)升高，超过阴性对照质粒组(0.520±0.009)的122%(t＝160.07，P<0.05)。

靶向性抑制抗凋亡相关基因Bcl－2的表达可提高A549细胞对依托泊苷、顺铂、紫杉醇、长春瑞滨等化疗药物的敏感性，下调ERCC1、TYMS、TOP2α基因的表达。