【摘 要】
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目的利用大肠杆菌基因工程系统建立人端粒酶逆转录酶h TERT抗原肽的高效制备方法.方法利用抗原表位预测软件SYFPEITHI、BIMAS与Epi Jen确定截短表达策略,通过Prot Scale软件
【机 构】
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广东药科大学生命科学与生物制药学院
【基金项目】
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广东省科技计划项目(2014A020210027);广东省自然科学基金项目(A2015230);广东高校省级重大科研项目(2016KZDXM042)
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目的利用大肠杆菌基因工程系统建立人端粒酶逆转录酶h TERT抗原肽的高效制备方法.方法利用抗原表位预测软件SYFPEITHI、BIMAS与Epi Jen确定截短表达策略,通过Prot Scale软件亲水性分析改善表达产物的可溶性.目的基因克隆于表达载体p ET21b,高浓度尿素裂解法溶解包涵体蛋白,稀释复性法复性.结果 3个覆盖全长h TERT的截短片段仅Ser480-Leu665能高效表达,但所形成的包涵体蛋白难溶于8 mol/L尿素.进一步优化所获的Tyr562-Ile665包涵体蛋白则可溶,且经纯化后可有效复性,产物纯度达到95%以上.结论利用大肠杆菌系统成功建立了h TERT抗原肽高效制备方法,为后续肿瘤疫苗的开发应用奠定了基础.
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