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利用PCR技术,从含有大肠杆菌菌毛抗原K99基因的质粒pX5K中扩增出0.4kb的K99菌毛抗原基因,然后将其亚克隆到pGEM--easy载体上,并转化至受体菌JM109中,采用碱性裂解法提取质粒DNA后,经Ncol和EcoR I双酶切分析和核苷酸序列分析,证明插入的K99基因片段具有正确的核苷酸序列.