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运用Mannich反应，将褪黑激素(MLT)与牛血清白蛋白(BSA)连结，制备MLT完全抗原。MLT与BSA连结比为12∶1。将此完全抗原免疫5只雄兔，制备特异性抗体；将MLT用125I标记，薄层层析筛选标记物，制备高纯度的放射性标记物，建立竞争性MLT-RIA法。本法可测范围为15.31～1 500 pg，灵敏度为每管15.31 pg，批内变异系数6.7%，批间变异系数14.8%。用此法测定夏至时考力代羊昼夜血样，测定结果与国外基本一致；测定夏至时湖羊昼夜血样，发现湖羊MLT分泌有其特殊性，即血液MLT