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目的:探讨五子衍宗方（Wuzi Yanzong Fang,WYF）基于磷酯酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路对老龄大鼠精原干细胞增殖的作用及其机制研究。方法:以自然衰老大鼠为研究对象,将40只18月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为老龄模型组,WYF低、中、高剂量组,每组10只,另以10只2月龄大鼠作为青年组。WYF低、中、高剂量组分别灌胃给药0.4,0.8,1.6 g·kg-1,青年组、老龄模型组分别灌胃给予生理盐水,每周停药2 d,持续给药4个月。末次给药后麻醉处死大鼠,快速取出睾丸组织。免疫荧光法检测Sertoli细胞数量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）,前髓细胞锌指蛋白（PLZF）,干细胞因子（SCF）和骨形态蛋白4（BMP4）mRNA表达水平,免疫荧光法检测精原干细胞数量及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光法检测磷酯酰肌醇3-激酶（PI3K）和磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）的表达与定位。结果:与青年组比较,老龄模型组Sertoli细胞数量未见明显差异,而GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著降低,精原干细胞数量减少,PCNA表达下降,PI3K,p-Akt蛋白表达降低（P<0.01）;与老龄模型组比较,WYF各剂量组GDNF,PLZF,SCF和BMP4 mRNA表达水平显著升高,精原干细胞数量增多,PCNA表达上调,PI3K,p-Akt表达明显增多（P<0.05,P<0.01）。结论:WYF能够明显促进老龄大鼠精原干细胞的增殖,其作用机制可能与调节睾丸内PI3K/Akt信号通路有关。