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[摘要] 目的探讨络活喜(amlodipine)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)血管壁重塑生物学机制。方法将10周龄雄性24只SHR随机分成3组，每组8只。对照组(SHRc)不作治疗，并与同周龄Wistar鼠组(n=8)作比较。生理盐水组(sRRNs)，络活喜组(sHRA)分别经生理盐水、络活喜治疗8周后光镜观察血管几何形态，采用原位杂交及半定量RT—PCR方法检测ET一1(endothelin-1)、MMP-2(matrix metal-loproteinase-2)表达水平。结果 对照组，生理盐水组血压明显增高，管腔增大，管壁明显增厚(P<0．05)，尤以血管中层平滑肌细胞(vascular smooth cell，VSMC)肥大为主(P<0．01)；ET-1，MMP-2表达显著增加(P<0．05)。治疗8周后，络活喜组血压明显降低，管壁变薄；ET-1、MMP-2表达减少(P<0．05)。结论络活喜可能通过抑制血管壁ET-1与MMP-2表达，遏制自发性高血压大鼠血管壁重塑。
[关键词] 自发性高血压；血管壁重塑；络活喜；大鼠
中图分类号：R544．1 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2007)02-0092-03
近年来研究表明，高血压病不仅是血流动力学异常的疾病，而且是内皮炎症性疾病。由于血压增高，血管壁中层平滑肌细胞(vsMc)增生肥大并向内膜迁移，造成血管壁肥厚、管腔狭窄，进而导致外周阻力和血压的持续升高[1]。Ascot研究证实络活喜可显著降血压，减少心血管事件[2]。本文报告对络活喜逆转SHR血管壁重塑的动物实验的结果。
1材料与方法
1．1材料：
1．1．1实验动物：SHR24只，雄性，1O周龄。同周龄雄性血压正常的Wistar大鼠8只。
1．1．2主要试剂与仪器：总RNA抽提试剂Trizol(100mL／瓶)，ET—l(内皮素)引物[3]，MMP-2(基质金属蛋白酶)引物[4]，原位杂交试剂盒(ET-l及MMP-2mRNA)；高速台式冷冻离心机，计算机彩色病理图像分析系统，等。
1．2方法：
1．2．1动物分组及给药方法：参照随机数字表将24只10周龄(w)SHR分成3组：(1)对照组(SHRc)：共8只，测压后处死检测。(2)生理盐水组(sHRNs)：共8只，生理盐水(Ns)10mL／(kg·d)，每日灌胃一次。8周后处死检测。(3)络活喜组(SHRA)：共8只，络活喜以30mg／(kg·d)溶于2ml生理盐水中，每日灌胃一次。8周后处死检测。
1．2．2血压测定：各组大鼠在实验入选前及处死前均作血压测定。
1．2．3几何形态指标、显微结构分析：光镜下观察各大鼠胸主动脉形态变化，并用计算机图像分析系统血管参数测量软件2．0分别测血管外径(OD)、内径(ID)、壁厚(WT)及血管壁平滑肌细胞相对面积比(Aa％)。
1．2．4原位杂交：原位杂交结果用LeicaoS00MC图像分析系统对染色强度进行定量分析。
1．2．5 RT-PCR：取血管平滑肌細胞RNA进行多聚酶链反应(PCR)，各组PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳并半定量分析，计算ET-1与MMP-2相对表达水平。
1．2．6统计学处理：结果以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSSll．0统计软件包分析，治疗前后血压变化及主动脉几何形态指标比较、ET—l、MMP－2表达水平比较用ANOVA分析。平滑肌增长率(R 0f VSMC·Ih)采用公式：(后一时相点值一前一时相点值)÷前一时相点值×100％(前后一时相点值均用SHR各测值)与ET-l、MMP-2的相关性用偏相关与t检验。检验标准以P<0．05为差异有统计学意义。
2结果
2．1三组大鼠治疗前平均收缩压：分别为193．30±5．10mmHg、192．43±7．20mmHg、191．67±6．30mmHg。经ANOVA分析P>0．05。Wistar大鼠收缩压为126．10±7．00mmHg，显著低于SHRc组(t=18．24，P<0．01)。经8周治疗后，SHRNs组血压(194．30±6．80mmHg)，SHRA组(158．00±11．80mmHg)血压显著降低。
2．2各组大鼠主动脉几何形态(见表1，图l－3)：实验结果显示10周龄SHR的内径、外径明显大于同周龄Wistar大鼠，壁厚明显增厚。治疗8周后，SHRNs组管壁明显厚于治疗组。
2．4半定量RT—PCR方法检测ET-l、MMP-2基因表达水平(见表3，图4)：SHRc表达ET-l、MMP-2明显增多(P<0．05)。治疗8周后，SHRNs组ET-1、MMP-2增多(P<0．05)。
2．5 VSMC增长率、MMP-2、ET-l表达水平的偏相关检验(见表4)：与Wistar组比较，SHRC表达ET-1，MMP-2显明增多(P
3讨论
络活喜(左旋氨氯地平)是第三代二氢吡啶类药物，能有效地阻滞钙离子通过“慢”通道流入血管平滑肌细胞，从而产生血管舒张效应。降压可以通过改变力学效应而达到遏制血管壁重塑作用[5]。
本文结果显示：与同龄Wistar大鼠比较，SHRc(10w)的血管壁明显增厚，管壁面积明显增大，且以VSMC相对面积比增多为主。血管壁重塑生物学特点ET-l与MMP-2局部表达水平增加，ET-1与MMP-2正相关，共同促进血管壁增厚。络活喜8周治疗后血管壁ET-l与MMP-2表达水平减少，各几何形态指标无进一步恶化，部分得到改善。络活喜遏制血管壁重塑[6]机制可能是影响细胞内钙通道，抑制VSMC生长；改善血流动力学，矫正交感神经系统与RAS系统紊乱；逆转血管内皮功能失调，减少内皮素分泌，恢复NO／AngⅡ平衡[7]；刺激细胞凋亡，逆转血管重塑中细胞凋亡与细胞生长间的失衡状态。
众多研究证实络活喜可以逆转高血压病LVH，本文显示络活喜也可以通过改善生物学因素遏制高血压病血管壁重塑，并且具有稳定内皮细胞功能，因此将有广阔的前景。
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[关键词] 自发性高血压；血管壁重塑；络活喜；大鼠
中图分类号：R544．1 文献标识码：A 文章编号：1009-816X(2007)02-0092-03
近年来研究表明，高血压病不仅是血流动力学异常的疾病，而且是内皮炎症性疾病。由于血压增高，血管壁中层平滑肌细胞(vsMc)增生肥大并向内膜迁移，造成血管壁肥厚、管腔狭窄，进而导致外周阻力和血压的持续升高[1]。Ascot研究证实络活喜可显著降血压，减少心血管事件[2]。本文报告对络活喜逆转SHR血管壁重塑的动物实验的结果。
1材料与方法
1．1材料：
1．1．1实验动物：SHR24只，雄性，1O周龄。同周龄雄性血压正常的Wistar大鼠8只。
1．1．2主要试剂与仪器：总RNA抽提试剂Trizol(100mL／瓶)，ET—l(内皮素)引物[3]，MMP-2(基质金属蛋白酶)引物[4]，原位杂交试剂盒(ET-l及MMP-2mRNA)；高速台式冷冻离心机，计算机彩色病理图像分析系统，等。
1．2方法：
1．2．1动物分组及给药方法：参照随机数字表将24只10周龄(w)SHR分成3组：(1)对照组(SHRc)：共8只，测压后处死检测。(2)生理盐水组(sHRNs)：共8只，生理盐水(Ns)10mL／(kg·d)，每日灌胃一次。8周后处死检测。(3)络活喜组(SHRA)：共8只，络活喜以30mg／(kg·d)溶于2ml生理盐水中，每日灌胃一次。8周后处死检测。
1．2．2血压测定：各组大鼠在实验入选前及处死前均作血压测定。
1．2．3几何形态指标、显微结构分析：光镜下观察各大鼠胸主动脉形态变化，并用计算机图像分析系统血管参数测量软件2．0分别测血管外径(OD)、内径(ID)、壁厚(WT)及血管壁平滑肌细胞相对面积比(Aa％)。
1．2．4原位杂交：原位杂交结果用LeicaoS00MC图像分析系统对染色强度进行定量分析。
1．2．5 RT-PCR：取血管平滑肌細胞RNA进行多聚酶链反应(PCR)，各组PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳并半定量分析，计算ET-1与MMP-2相对表达水平。
1．2．6统计学处理：结果以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSSll．0统计软件包分析，治疗前后血压变化及主动脉几何形态指标比较、ET—l、MMP－2表达水平比较用ANOVA分析。平滑肌增长率(R 0f VSMC·Ih)采用公式：(后一时相点值一前一时相点值)÷前一时相点值×100％(前后一时相点值均用SHR各测值)与ET-l、MMP-2的相关性用偏相关与t检验。检验标准以P<0．05为差异有统计学意义。
2结果
2．1三组大鼠治疗前平均收缩压：分别为193．30±5．10mmHg、192．43±7．20mmHg、191．67±6．30mmHg。经ANOVA分析P>0．05。Wistar大鼠收缩压为126．10±7．00mmHg，显著低于SHRc组(t=18．24，P<0．01)。经8周治疗后，SHRNs组血压(194．30±6．80mmHg)，SHRA组(158．00±11．80mmHg)血压显著降低。
2．2各组大鼠主动脉几何形态(见表1，图l－3)：实验结果显示10周龄SHR的内径、外径明显大于同周龄Wistar大鼠，壁厚明显增厚。治疗8周后，SHRNs组管壁明显厚于治疗组。
2．4半定量RT—PCR方法检测ET-l、MMP-2基因表达水平(见表3，图4)：SHRc表达ET-l、MMP-2明显增多(P<0．05)。治疗8周后，SHRNs组ET-1、MMP-2增多(P<0．05)。
2．5 VSMC增长率、MMP-2、ET-l表达水平的偏相关检验(见表4)：与Wistar组比较，SHRC表达ET-1，MMP-2显明增多(P
3讨论
络活喜(左旋氨氯地平)是第三代二氢吡啶类药物，能有效地阻滞钙离子通过“慢”通道流入血管平滑肌细胞，从而产生血管舒张效应。降压可以通过改变力学效应而达到遏制血管壁重塑作用[5]。
本文结果显示：与同龄Wistar大鼠比较，SHRc(10w)的血管壁明显增厚，管壁面积明显增大，且以VSMC相对面积比增多为主。血管壁重塑生物学特点ET-l与MMP-2局部表达水平增加，ET-1与MMP-2正相关，共同促进血管壁增厚。络活喜8周治疗后血管壁ET-l与MMP-2表达水平减少，各几何形态指标无进一步恶化，部分得到改善。络活喜遏制血管壁重塑[6]机制可能是影响细胞内钙通道，抑制VSMC生长；改善血流动力学，矫正交感神经系统与RAS系统紊乱；逆转血管内皮功能失调，减少内皮素分泌，恢复NO／AngⅡ平衡[7]；刺激细胞凋亡，逆转血管重塑中细胞凋亡与细胞生长间的失衡状态。
众多研究证实络活喜可以逆转高血压病LVH，本文显示络活喜也可以通过改善生物学因素遏制高血压病血管壁重塑，并且具有稳定内皮细胞功能，因此将有广阔的前景。
本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文