目的　研究在非β细胞中表达成熟胰岛素 ,探索替代胰岛素注射或胰岛移植治疗 1型糖尿病的方法。方法　采用重叠区扩增基因拼接法 (genesplicingbyoverlapextention ,geneSOEing)自胰岛素原基因组基因中扩增胰岛素原的cDNA ,并于C肽的两端引入蛋白酶furin的识别和切割位点Arg Xaa Lys/Arg Arg。将获得的突变体重组表达载体PcDNA3 1/C ,通过脂质体法转染体外培养的Hela ,2 93,和L0 2细胞 ,G4 18筛选L0 2细胞。同时用放射免疫和免疫荧光的方法监测细胞内外胰岛素的表达水平。结果　成功地对胰岛素原cDNA的三个位点进行了突变 ,空载体转染的细胞无胰岛素表达。而在转染突变后胰岛素原基因cDNA的细胞培养液中胰岛素的表达量各不相同 :Hela和 2 93细胞的暂态表达量分别为 8 4 5～ 188 0 0μIU/ 2 0× 10 6 cells·d 1和 15 9 88～ 2 4 2 14 μIU/ 2 0× 10 6 cells·d 1,筛选出的L0 2各细胞株的表达量为 2 5 6～ 6 1 95μIU/ 2 0× 10 6 cells·d 1;免疫荧光显示L0 2细胞浆内有囊泡状分泌颗粒。结论　突变的胰岛素原cDNA能成功转染非胰岛 β细胞并表达胰岛素 ,为进一步开展糖尿病的基因治疗研究奠定了基础。