【摘 要】
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目的:构建并筛选针对大鼠Pael-R基因的有效shRNA干扰载体并鉴定其干扰效果。方法:构建三个针对大鼠Pael-R基因的shRNA表达载体,利用脂质体转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12,
【机 构】
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中南大学湘雅二医院神经内科; 中南大学湘雅医院神经内科;
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目的:构建并筛选针对大鼠Pael-R基因的有效shRNA干扰载体并鉴定其干扰效果。方法:构建三个针对大鼠Pael-R基因的shRNA表达载体,利用脂质体转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12,以G418筛选抗性细胞克隆并利用RT-PCR和Western Blotting鉴定Pael-R基因的表达。结果:在构建的3个干扰载体中,转染pRNA-U6/PaelR-3的细胞克隆中Pael-R表达在mRNA水平为29%,与对照组相比下降了45.3%,在蛋白质水平为32%,下降了27.3%(P<0.05)。结论:构建了Pael-R基因的有效干扰载体pRNA-U6/PaelR-3,并得到了Pael-R基因表达下调型PC12细胞克隆,为研究Pael-R基因表达下调在帕金森病的发病机制及其治疗中的作用奠定了基础。
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