“叶绿体色素提取和分离”实验的有效改进

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  “叶绿体色素的提取和分离”实验利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性将菠菜等绿叶中的色素提取出来,然后用纸层析法将其一一分离。但在实际操作过程中往往存在以下问题影响实验效果:
  (1)学生难以准确把握实验中需加入的CaCO和Si的量,因而使得到的滤液中混有CaCO和SiO使收集得到的滤液浑浊,从而影响荧光现象的观察。
  (2)用毛细吸管划出的滤液细线粗,且线条不均匀,影响层析效果。
  (3)用毛细吸管划出的滤液细线淡,色素含量少,影响层析效果。
  (4)有些学校不一定具备自制毛细吸管的条件。
  针对以上问题,我在实践中不断探索、不断进取,对“叶绿体色素的提取和分离”实验进行了有效的改进,并收到了显著的效果。现将具体做法介绍如下。
  
  1.实验的改进
  
  1.1过滤方法的改进
  采用重复过滤的方法可提高叶绿体色素提取液中色素的纯度和浓度。具体做法如下:
  (1)取2个干净试管置于试管架上,将起过滤作用的漏斗置于其中1个试管上;
  (2)将研磨好的叶泥全部倒入漏斗中,用少量无水乙醇清洗研钵,并将清洗液一起倒入漏斗内;
  (3)将漏斗移到另一干净的试管上,将第一次过滤后得到的滤液倒入盛有叶泥的漏斗内再次进行过滤;
  (4)这样反复多次过滤后,漏斗内的叶泥残渣由绿逐渐转白,这说明叶泥中的色素已被充分提取出来,最终将得到澄清的浓绿色的色素提取液。
  
  1.2划线方法的改进
  采用色素涂片的方法划滤液细线,省时、省料且实验效果明显,具体做法如下:
  (1)取2块干净的载玻片,在其中一块载玻片上滴2滴色素提取液;
  (2)取另一块载玻片像制作血涂片那样将2滴色素提取液推平,制成一张叶绿体色素涂片;
  (3)略等片刻(约30左右),取一张滤纸条在距末端1.5cm处对折,得到一对折线;
  (4)用对折后的滤纸小心将载玻片上的色素全部擦干净(操作时始终使对折线与载玻片相垂直);
  (5)当载玻片上的色素被滤纸擦干净后,将对折线反折后拉平,即可看到在距滤纸条下端1.5cm处有一条深绿色的滤液细线
  
  2.实验改进后的优点
  
  (1)采用多次重复过滤的方法,有利于将叶泥中色素充分提取出来,可提高色素提取液中色素的浓度,和纯度。
  (2)利用涂片法划滤液细线,无需拉制毛细吸管,无需重复划线,只需将滤纸折线在涂片上来回一擦即可完成“划线”,省料、省工、省时。
  (3)利用涂片法得到的滤液细线均匀细直。
  实践证明利用涂片法得到的滤液细线中色素含量高,颜色深,纸层析效果十分明显。
  
  3.涂片法划线的原理
  
  由于叶绿体色素具有不溶于水而溶于有机溶剂的特性,因此将2滴色素提取液制成涂片后,由于涂片上的无水乙醇很容易挥发,而溶于其中的色素却均匀地残留在载玻片上,又因提取液中含有的极少量水分(来自细胞液),保证了涂片上色素的湿度,所以载玻片上的色素不会因为无水乙醇的挥发而干燥,这样在略等片刻之后,即可将载玻片上的色素全部擦在滤纸折线上,既保证了色素的含量又保证了滤液细线的均匀细直,再进行层析实验,效果非常理想。
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