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目的 对中国流行的美洲钩虫和十二指肠钩虫进行PCR鉴别.方法 通过对中国五省钩虫患者使用双羟萘酸噻嘧啶驱虫获得钩虫成虫,抽提单条美洲钩虫和十二指肠钩虫总DNA(各25条),用美洲钩虫和十二指肠钩虫线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基1(mitochondrial cytochrome oxidase 1,CO1)基因特异性引物(NaF-NaR,AdF-AdR)进行PCR扩增.对PCR产物进行电泳、测序.使用相同引物对日本血吸虫、鞭虫、犬钩虫DNA进行PCR扩增.结果 25份美洲钩虫和25份十二指肠钩虫均能各扩增出约500 bp和700 bp的条带,2种PCR产物分别与美洲钩虫CO1(GenBank登录号为AF303136.1)和十二指肠钩虫CO1(GenBank登录号为AJ417718.1)基因片段序列一致性为99％和98％.但2对引物用于其他虫种DNA则无条带.结论 引物NaF-NaR、AdF-AdR能够用于区分在中国流行的美洲钩虫和十二指肠钩虫。