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【目的】构建藤黄微球菌复苏促进因子Rpf结构域突变体基因E54K、E54A的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达和纯化。【方法】采用PCR方法从藤黄微球菌基因组中扩增出Rpf结构域E54A、E54K突变体基因，连接进入pMD-18T载体中，测序正确的基因插入到pGEX-4T-1表达载体中，转化大肠杆菌DH5ct，经IPTG诱导，SDS—PAGE鉴定表达蛋白，利用Rpf结构域单克隆抗体进行Western—blotting分析。用GS-4B亲和层析柱纯化目的蛋白。【结果】获得藤黄微球菌Rpf结构域E54K和E54A