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目的
观察肝细胞生长因子激活物抑制因子-1(HAI-1)基因过表达诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬性的现象,初步探讨其发生的可能机制。
方法采用重组质粒pcDNA3.1-HAI-1转染PC-3细胞,并设空载体为对照组。转染72 h后提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测HAI-1、自噬标志物(LC3-B)基因表达的变化,Western印迹方法检测LC3-B蛋白表达水平的变化,透射电子显微镜及细胞免疫荧光测定仪观察细胞超微结构及自噬水平。
结果与对照组相比,LC3-B的表达明显增多(3.42±0.29,P<0.05);透射电子显微镜观察可见,前列腺癌PC-3细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体。
结论HAI-1基因可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬。