【摘 要】
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目的 探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因同时沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用.方法 采用核糖核酸(RNA)干扰技术,运用MMP-2和MMP-9
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉科,哈尔滨医科大学药学院
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目的 探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因同时沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用.方法 采用核糖核酸(RNA)干扰技术,运用MMP-2和MMP-9基因小于扰RNA(siRNA)的重组慢病毒(MMP-2-RNAi-lentivirus,MMP-9-RNAi-lentivirus)共同转导喉鳞癌Hep-2细胞,并运用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测Hep-2细胞MMP-2和MMP-9基因的表达.通过Boyden小室实验观察MMP-2-RNAi-lentivirus和MMP-9-RNAi-lentivirus重组慢病毒转导对喉癌细胞侵袭能力的影响.构建喉癌移植瘤模型,将MMP-2-RNAi-lentivirus和MMP-9-RNAi-lentivirus重组慢病毒瘤内注射,观察抑瘤效果.运用免疫组化方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,评估其对细胞增殖的影响.结果 重组慢病毒MMP-2-RNAi-lentivirus和MMP-9-RNAi-lentivirus能高效地转导入靶细胞.RT-PCR检测显示,转导后的Hep-2细胞中MMP-2和MMP-9表达阴性.侵袭实验显示,实验组Hep-2细胞中穿过人工基底膜的细胞数为(14±4)个,明显少于空载体对照组的(32±6)个(P＜0.01).体内实验显示,MMP-2-RNAi-lentivirus和MMP-9-RNAi-lentivirus重组慢病毒瘤内注射后,裸鼠移植瘤平均重量和平均体积明显小于对照组,抑瘤率为46.59%,PCNA指数也明显降低.结论 慢病毒介导的MMP-2和MMP-9基因共同沉默能有效的抑制喉癌的侵袭,生长及增殖.
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