小干扰RNA沉默survivin基因表达对肿瘤细胞A549、Hela S3和K562的影响及小干扰RNA序列的筛选

来源 :中华实用儿科临床杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heiyun28
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目的

探讨针对survivin基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肺癌A549、宫颈癌Hela S3及急性髓系白血病K562细胞株的效应,筛选有效的siRNA序列。

方法

设计并合成3条针对survivin基因的siRNA,通过Hiperfect脂质体转染试剂分别转染A549、Hela S3及K562细胞,培养48~72 h后,用SYBR GreenⅠ的实时定量PCR(RT-PCR)方法检测肿瘤细胞survivin mRNA的表达,用WST-8细胞计数试剂盒检测肿瘤细胞的增殖。

结果

转染了特异性siRNA的肿瘤细胞survivin基因的表达量明显下降,转染后48 h基因表达抑制率为57.47%~88.53%,72 h为69.94%~95.03%;转染后各组肿瘤细胞增殖受到明显抑制,转染后48 h的细胞增殖抑制率为27.88%~47.36%,72 h为42.59%~57.29%;其中序列1的效果最为显著,对3种肿瘤细胞survivin基因表达的抑制率48 h均在75%以上、72 h均在90%以上,对细胞增殖的抑制率48 h均在40%以上、72 h均达50%以上。

结论

siRNA能有效沉默survivin基因在多种肿瘤细胞中的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,所设计的3条survivin siRNA序列均有活性,以序列1作用最强。

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