【摘 要】
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以鸡传染性支气管炎病毒（IBV）GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO-E,转化DH1
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31860715);广西科技重大专项(桂科AA17204057);广西自然科学基金项目(2018GXNSFAA281009);南宁市科技开发项目(20182024-1);南宁市兴宁区科技计划项目(2018A11)
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以鸡传染性支气管炎病毒（IBV）GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBacTM/HBM-TOPO-E,转化DH10BacTM感受态,经同源重组后转染Sf9细胞,并应用间接免疫荧光试验（IFA）和Western blot进行鉴定。IFA结果表明融合了E蛋白的表达产物可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,在感染的细胞膜表面呈现强的黄绿色荧光;Western blot结果显示融合了E蛋白的表达产物既可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,也可被GX-YL5株的多抗血清特异性识别,且二者的目的条带大小均为16 ku。说明本研究已成功在Sf9细胞中表达了E蛋白,且表达产物抗原性良好,为进一步探讨IBV E蛋白的生物学功能和构建病毒样颗粒提供了基础。
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