论文部分内容阅读
摘 要：注射用头孢拉定为头孢拉定加适量助溶剂制成的无菌粉末。本文采用高压液相法测定了注射用头孢他啶中精氨酸和头孢拉定的含量，固定相为：思普乐C18液相色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相，检测波长为200nm；此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用头孢他啶中头孢拉定和精氨酸的含量测定。
关键词：注射用头孢拉定；高压液相法；含量
注射用头孢拉定属注射剂，为头孢拉定加适量助溶剂制成的无菌粉末，呈白色或类白色。注射用头孢拉定适用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等。头孢拉定化学名为（6R，7R）-7[（R）-2-氨基-2-（1，4-环己烯基）乙酰氨基]-3-甲基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4、2、0]辛-2-烯-2-羧酸。头孢拉定为第一代头孢菌素，对不产青霉素酶和产青霉素酶金葡菌、A组溶血性链球菌、产酶淋球菌、淋球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌和草绿色链球菌等革兰阳性球菌的部分菌株具良好抗菌作用。精氨酸为注射用头孢他啶的助溶剂。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送。本文采用高压液相法测定了注射用头孢他啶中精氨酸和头孢拉定的含量。
1 仪器与试药
LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；Precisa EP8200C 电子精密天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；MW实验室级超纯水器（北京盈安美诚科学仪器有限公司）；CLEAN PH30 酸碱度测试计（大迈仪器（上海）有限公司）；TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；美国必能信DHA1000超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；Lambda950紫外可见分光光度计（珀金埃尔默仪器（上海）有限公司）。头孢拉定和精氨酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海信裕生物科技有限公司）、磷酸（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、醋酸钠（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、磷酸二氢钾（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、甲醇（上海信裕生物科技有限公司）、甲酸（北京世纪奥科生物技术有限公司）、冰醋酸（北京世纪奥科生物技术有限公司）、三乙胺（东莞市谱标实验器材科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果[1-6]，确定色谱条件如下。色谱柱为思普乐C18液相色谱柱（4.6 mm×250mm，5μm）；乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相；检测波长为200nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按精氨酸峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取注射用头孢他啶适量，置于容量瓶内，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢拉定和精氨酸对照品适量，加流动相制成每1mL含头孢拉定50μg和精氨酸40μg的溶液，即得。
2.4 标准曲线的制备
分别精密称取头孢拉定、精氨酸对照品20.0mg、20mg，置100ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。依照色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，头孢拉定在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；精氨酸在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取头孢拉定和精氨酸对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.53%和0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别量取样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.56%，0.56%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8小时进样测定，供试品头孢拉定和精氨酸峰面积的RSD分别为0.52%和0.69%。结果表明样品溶液至少在8小时内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的头孢拉定和精氨酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.56%和0.58%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用头孢他啶三批样品中头孢拉定和精氨酸的含量，结果三批样品的头孢拉定和精氨酸含量分别为标示量的100.1%、100.2%、100.1%和30.1%、31.2%、30.5%。
3 讨论
分别考察乙腈-磷酸-0.2moloL-1磷酸二氢钾（50∶0.01：50），乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（20：50：30：0.01），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01），乙腈-磷酸-0.1moloL-1磷酸二氢钾 （40∶0.01：60）不同比例的流动相，结果以乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相。
参考文献
[1]梁蔚阳.AccQ-Tag法测定复方精氨酸胶囊中精氨酸的含量[J].中国药品标准，2003（4）.
[2]刘瑞，刘福利，罗国平，李品颖，杨丽英.HPLC法测定布洛芬注射液中精氨酸的含量[J].西北药学杂志，2013（4）.
[3]廖锐仑，闵翠娥，谭胜连.RP-HPLC测定注射用盐酸头孢吡肟中精氨酸的含量[J].广东药学院学报，2006（3）.
[4]赵艳红，王强，陈兆梅.柱前衍生化HPLC法测定人纤维蛋白原中精氨酸的含量[J].药学实践杂志，2006（5）.
[5]郭丹，陈娜娜，侯连兵.高效毛细管电泳法测定头孢拉定胶囊的含量[J].中国药事，2005（10）.
[6]谢选亮，陈悦.HPLC-ELSD法测定β-内酰胺类抗生素注射剂中精氨酸的含量[J].中国抗生素杂志，2008（6）.
关键词：注射用头孢拉定；高压液相法；含量
注射用头孢拉定属注射剂，为头孢拉定加适量助溶剂制成的无菌粉末，呈白色或类白色。注射用头孢拉定适用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等。头孢拉定化学名为（6R，7R）-7[（R）-2-氨基-2-（1，4-环己烯基）乙酰氨基]-3-甲基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4、2、0]辛-2-烯-2-羧酸。头孢拉定为第一代头孢菌素，对不产青霉素酶和产青霉素酶金葡菌、A组溶血性链球菌、产酶淋球菌、淋球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌和草绿色链球菌等革兰阳性球菌的部分菌株具良好抗菌作用。精氨酸为注射用头孢他啶的助溶剂。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送。本文采用高压液相法测定了注射用头孢他啶中精氨酸和头孢拉定的含量。
1 仪器与试药
LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；Precisa EP8200C 电子精密天平（上海精科天美科学仪器有限公司）；MW实验室级超纯水器（北京盈安美诚科学仪器有限公司）；CLEAN PH30 酸碱度测试计（大迈仪器（上海）有限公司）；TG16-WS台式高速离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；PHB恒温水浴箱（天津因赛科技发展有限公司）；美国必能信DHA1000超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；Lambda950紫外可见分光光度计（珀金埃尔默仪器（上海）有限公司）。头孢拉定和精氨酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海信裕生物科技有限公司）、磷酸（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、醋酸钠（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、磷酸二氢钾（东莞市谱标实验器材科技有限公司）、甲醇（上海信裕生物科技有限公司）、甲酸（北京世纪奥科生物技术有限公司）、冰醋酸（北京世纪奥科生物技术有限公司）、三乙胺（东莞市谱标实验器材科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果[1-6]，确定色谱条件如下。色谱柱为思普乐C18液相色谱柱（4.6 mm×250mm，5μm）；乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相；检测波长为200nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按精氨酸峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
精密量取注射用头孢他啶适量，置于容量瓶内，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢拉定和精氨酸对照品适量，加流动相制成每1mL含头孢拉定50μg和精氨酸40μg的溶液，即得。
2.4 标准曲线的制备
分别精密称取头孢拉定、精氨酸对照品20.0mg、20mg，置100ml容量瓶中，加入流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。依照色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，头孢拉定在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系；精氨酸在10～100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取头孢拉定和精氨酸对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.53%和0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6 重现性试验
分别量取样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值，RSD值为0.56%，0.56%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8小时进样测定，供试品头孢拉定和精氨酸峰面积的RSD分别为0.52%和0.69%。结果表明样品溶液至少在8小时内稳定。
2.8 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的头孢拉定和精氨酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.6%，RSD分别为0.56%和0.58%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用头孢他啶三批样品中头孢拉定和精氨酸的含量，结果三批样品的头孢拉定和精氨酸含量分别为标示量的100.1%、100.2%、100.1%和30.1%、31.2%、30.5%。
3 讨论
分别考察乙腈-磷酸-0.2moloL-1磷酸二氢钾（50∶0.01：50），乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（20：50：30：0.01），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氢钾-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01），乙腈-磷酸-0.1moloL-1磷酸二氢钾 （40∶0.01：60）不同比例的流动相，结果以乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-水-4%醋酸钠-冰醋酸（13：57：30：0.01）为流动相。
参考文献
[1]梁蔚阳.AccQ-Tag法测定复方精氨酸胶囊中精氨酸的含量[J].中国药品标准，2003（4）.
[2]刘瑞，刘福利，罗国平，李品颖，杨丽英.HPLC法测定布洛芬注射液中精氨酸的含量[J].西北药学杂志，2013（4）.
[3]廖锐仑，闵翠娥，谭胜连.RP-HPLC测定注射用盐酸头孢吡肟中精氨酸的含量[J].广东药学院学报，2006（3）.
[4]赵艳红，王强，陈兆梅.柱前衍生化HPLC法测定人纤维蛋白原中精氨酸的含量[J].药学实践杂志，2006（5）.
[5]郭丹，陈娜娜，侯连兵.高效毛细管电泳法测定头孢拉定胶囊的含量[J].中国药事，2005（10）.
[6]谢选亮，陈悦.HPLC-ELSD法测定β-内酰胺类抗生素注射剂中精氨酸的含量[J].中国抗生素杂志，2008（6）.