目的　寻找钩体病基因工程疫苗保护性抗原候选。方法　 （１） 鸟枪法构建赖型钩体０１７ 株基因库； （２） α互补、 Ｄ Ｎ Ａ 原位杂交筛选重组质粒； （３） Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交行 Ｄ Ｎ Ａ 同源性分析； （４） 双脱氧链中止测重组 Ｄ Ｎ Ａ 序列及与外膜蛋白基因 （ｏｍｐ） 匹配； （５） Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导重组子表达； （６） 免疫印迹、 Ｍ Ａ Ｔ、 Ｅ Ｉ Ａ、 Ｍ Ｔ Ｔ 检测表达蛋白抗原特性及 Ｉ Ｌ—２ 、 Ｉ Ｌ—６ 活性； （７） 纯化表达蛋白ｐ６８ 进行豚鼠主动免疫 攻击实验， 观免疫保护性。结果　 （１） 重组质粒ｐ Ｄ Ｊ Ｈ２ （ 亚克隆ｐ Ｄ Ｊｔ） 插入片段１９ｋｂ ， 与各致病钩体不同片段 Ｄ Ｎ Ａ 高度同源； （２） 序列测定插入片段实际１８１１ｂｐ ， 推测有２ 个读框 （ Ｏ Ｒ Ｆ） ， 各有启动子、终止密码。查 Ｇｅｎ Ｂａｎｋ Ｅ Ｍ Ｂ Ｌ 无类似序列； （３） 表达蛋白分子量６８ｋ Ｄ （ｐ６８） ； （４） ｐ６８ 是胸腺依赖性 （ Ｔ Ｄ） 抗原，有良好抗原特性， 抗血清效价１ ： ５２４２８８ ， （ Ｅ Ｉ Ａ） 具很强的动物免疫保护作用。结论　 （１） ｐ６８ 编码基因是致病钩体保护性抗原基因； （２） ｐ６８ 是致病钩体外膜保护性抗原， Objective To search for candidate antigen of genetic engineering vaccine for leptospirosis. Methods (1) The shotgun library was used to construct the 017 genomic library of Lysozyme (Leptospira interrogans); (2) α complementary and D N A in situ hybridization were used to screen recombinant plasmids; (3) D N A homology analysis of Southern hybridization; (5) Ip T G induced recombinant expression; (6) Western blot, M A T, E I A, M T T detection (7) Purified protein p68 was used in guinea pig active immunization challenge experiment, and the immunopotentiation was observed. RESULTS: (1) The recombinant plasmid pDJH (subclone pD Jt) was 19kb in length and highly homologous to different DNA fragments of different pathogenic Leptospira species (DN A). (2) The sequence of the inserted fragment was 1811bp, 2 reading frames (ORFs), each with a promoter, stop password. (3) Expression of protein molecular weight 68k D (p68); (4) p68 is a thymus-dependent (T D) antigen, has good antigenic properties, antiserum titer 1: 524288 , (E I A) has a strong animal immune protection. Conclusions (1) The p68 gene is a protective antigen gene of pathogenic Leptospira; (2) p68 is a protective antigen of the outer membrane of pathogenic Leptospira,