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目的
获得D型沙眼衣原体多形外膜蛋白(Pmp)I的全长(PmpI-FL)和羧基端蛋白(PmpI-C)，并鉴定蛋白免疫原性。
方法用PCR扩增目的基因PmpI-FL和PmpI-C，分别将其定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5α，提取质粒进行酶切、PCR、测序鉴定。再将重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达，考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠分别纯化PmpI-FL-GST融合蛋白和PmpI-C-GST融合蛋白。用纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠，ELISA测定抗体效价。
结果克隆目的基因PmpI-FL和PmpI-C的长度分别为2 659和1 195 bp，序列均与基因库中一致，考马斯亮蓝染色和免疫印迹显示目的蛋白相对分子质量分别约为122 000和69 000；并得到纯化的蛋白。免疫小鼠所得血清经ELISA检测多克隆抗体效价达1∶12 800(抗PmpI-FL)和1∶6 400(抗PmpI-C)。
结论成功表达具有强免疫原性的PmpI-FL-GST和PmpI-C-GST两种融合蛋白，为进一步研究其功能奠定基础。