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【摘要】 目的：对2例正反定型不符的无偿献血者标本进行血型鉴定。方法：(1)分别用3个试剂生产厂家的单克隆抗血清和自配的A1、B、O红细胞进行ABO正反定型；(2)和人源抗血清、抗-H、抗-A1、A2及A2B细胞反应进行亚型鉴定，并对血浆中的抗体活性及效价进行测定；(3)进一步进行基因检测。结果：血型血清学及基因检测证实2例献血者为罕见的B(A)表型，且血清中均含有在37 ℃有反应活性的抗-A抗体。结论：B(A)表型的特点是红细胞存在弱的A抗原，而血清中却存在较强的抗-A和抗-A1抗体，所以极易被误定为B型而输注给B型患者，从而发生输血不良反应，给安全输血带来极大隐患。因此，采供血机构应使用高质量的抗血清，防止B(A)表型漏检，保证临床输血安全。同时对该血型献血者的受血安全问题进行指导也十分重要。
【关键词】 ABO血型； B(A)表型
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.067
笔者在工作中发现2例正反定型不符的无偿献血者标本，经一系列血型血清学检查，证实为罕见的B(A)表型，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 均来源于本市街头无偿献血者，其中女性1名，曾有献血史，献血档案记录为B型；男性1名，为初次献血者。
1.2 材料
1.2.1 试剂 单克隆抗-A、抗-B(分别由国内甲、乙、丙3个试剂生产厂家提供，均经中国食品药品鉴定研究院鉴定合格并有合格标签)；人源抗-A、人源抗-B、抗-A1、抗-H(均由上海血液生物医药有限责任公司提供)；A2、A2B细胞是本室制备的冰冻解冻红细胞；A1、B、O红细胞是本室使用当天自配的新鲜红细胞。
1.2.2 仪器设备 KA-2200血球洗涤离心机(日本KUBOTA公司)；SBHW2-1型电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂有限责任公司)。
1.3 方法
1.3.1 ABO正反定型 分别用3个试剂生产厂家的单克隆抗血清和自配的A1、B、O红细胞进行正反定型[1]。结果见表1。1.3.2 亚型检测 (1)和多克隆人源抗-A 、抗-B反应；(2)和抗-H反应并观察其反应强度；(3)观察和抗-A1的反应情况；(4)观察和A2细胞及A2B细胞的反应情况。结果见表2。
1.3.3 血浆中抗-A1和抗-A效价测定 (1)取2名献血者血浆各0.3 ml，分别和0.15 ml A2细胞混合，置4 ℃冰箱吸收40 min，当吸收后的血浆和A2细胞的反应呈阴性时，血浆中所剩抗体即为抗-A1。(2)取献血者吸收后的血浆0.1 ml，用生理盐水倍比稀释，加入等量2% A1红细胞测定抗-A1的凝集效价；(3)取献血者未吸收的血浆0.1 ml，用生理盐水倍比稀释，加入等量2% A2红细胞测定抗-A的凝集效价。结果见表2。
1.3.4 基因检测 将献血者标本快递至上海市血液中心，由血型参比实验室协助进行基因检测。
2 结果
2.1 血型血清学结果 由表1、表2看，2名献血者的血清学反应格局可归纳为以下3点：(1)红细胞A抗原减弱，B抗原正常；(2)H抗原明显增强，与O细胞反应强度相当；(3)血清凝集A1细胞，也凝集A2细胞，即血清中既存在抗-A1，又存在抗-A，均符合B(A)表型的血型血清学特点[2]，所以初步确定为B(A)表型。
2.2 基因检测结果 经上海市血液中心血型参比实验室进行基因检测，2名献血者分别具有B(A)﹡02和B(A)﹡04等位基因，所以进一步证实为B(A)表型。
3 讨论
ABO亚型在血型血清学试验中是导致正反定型不一致的主要原因之一。其中B(A)表型是AB型中非常少见的亚型，在人群中的发生频率大约在1/17万~1/58万[3]。其形成的机制，在文献[4]中有这样的描述：(1)A和B糖基转移酶在选择催化供体底物时并不是十分精确的，A和B的基因产物可能存在少部分的重叠，在合适的条件下，高活性的B转移酶能够催化Ｎ－乙酰氨基半乳糖到一种低分子质量的H类似物(2′-岩藻糖)，形成一种具有A活性的结构。(2)在某些个体的分子遗传学研究结果显示，与上述高活性B转移酶能够产生Ａ抗原的理论并不一致。有２例的核苷酸序列与正常B基因相比具有一个有意义的突变，Ser235Gly，他们是B(A)/O杂合子，他们的父亲是A1B，基因型A1/B(A)，因而B(A)表现型更像是由于底物特异性的酶转变所致，而不是由于显著增强的B转移酶活性所致。
无论B(A)表型的形成是哪一种机制，其血型血清学均表现为弱的A抗原，而血清中却含有比较强的抗-A和抗-A1抗体，极易被误定为B型而输注给B型患者，从而导致输血不良反应，给临床安全输血带来极大隐患。笔者对2例献血者血浆中的抗体活性及效价进行测定，结果证实，两者均含有在37 ℃有反应活性的抗-A抗体，所以，当其作为受血者时，只能输注O型或B型红细胞，而不能输注AB型红细胞，但需要输注血浆类制品时，则只能输注AB型，否则，同样发生输血不良反应。由此进一步证明，正确鉴定献血者的B(A)表型以及对其输血安全问题进行指导的重要性。本文中的女性献血者，在以往献血时即被误定为B型，可能因本站原来初、复检均使用丙厂家生产的单克隆试剂所致。这种试剂可能是针对一种血型抗原的单个抗原决定簇的单克隆细胞技术生产的单一抗体试剂，抗原抗体反应极为单一[5]，当某一血型抗原的基因表位上哪怕是一个功能基团或原子不同、位置差异和立体构象变化，均可能不被识别而漏检[6]。本站采用系列参考品，选择凝集效价高、亲和力强、亚型标本检出率高的甲、乙两个生产厂家的单克隆抗体试剂，分别用于体采科初检和检验科复检，从而避免了漏检情况的再次发生。另外，由于该血型具有遗传性，本站征得献血者同意，将组织相关人员对其家系进行调查，以观察B(A)基因在家族中的传递情况，并进一步就献血、用血以及遗传等相关问题给予具体指导，确实保证两个家系家庭成员的输血安全。由此也体现了本站良好的献血服务及科学严谨的工作态度。
参考文献
[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246-271.
[2]郭忠慧，向东，朱自严，等.罕见的CisAB与B(A)血型的基因型研究[[J].中华医学遗传学杂志，2004，21(4)：321-324.
[3]范亚欣，孟庆丽，潘凌子，等.1例罕见的B(A)亚型患者的血型鉴定和配血[[J].中国输血杂志，2011，24(10)：892-893.
[4] 杰夫.丹尼尔.人类血型[M].朱自严，译.北京：科学出版社，2007：27-28.
[5] 宿兰，杨世英，廉维，等.罕见的B(A)表型血清学及基因检测[J].中国输血杂志，2010，23(3)：200-202.
[6] 吴敏慧，刘毅，刘洪莉，等.ABO血型正反定型不符确认试验结果分析[J].临床输血与检验，2005，7(3)：198 -199.
(收稿日期：2012-04-28) (本文编辑：陈丹云)
【关键词】 ABO血型； B(A)表型
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.20.067
笔者在工作中发现2例正反定型不符的无偿献血者标本，经一系列血型血清学检查，证实为罕见的B(A)表型，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源 均来源于本市街头无偿献血者，其中女性1名，曾有献血史，献血档案记录为B型；男性1名，为初次献血者。
1.2 材料
1.2.1 试剂 单克隆抗-A、抗-B(分别由国内甲、乙、丙3个试剂生产厂家提供，均经中国食品药品鉴定研究院鉴定合格并有合格标签)；人源抗-A、人源抗-B、抗-A1、抗-H(均由上海血液生物医药有限责任公司提供)；A2、A2B细胞是本室制备的冰冻解冻红细胞；A1、B、O红细胞是本室使用当天自配的新鲜红细胞。
1.2.2 仪器设备 KA-2200血球洗涤离心机(日本KUBOTA公司)；SBHW2-1型电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂有限责任公司)。
1.3 方法
1.3.1 ABO正反定型 分别用3个试剂生产厂家的单克隆抗血清和自配的A1、B、O红细胞进行正反定型[1]。结果见表1。1.3.2 亚型检测 (1)和多克隆人源抗-A 、抗-B反应；(2)和抗-H反应并观察其反应强度；(3)观察和抗-A1的反应情况；(4)观察和A2细胞及A2B细胞的反应情况。结果见表2。
1.3.3 血浆中抗-A1和抗-A效价测定 (1)取2名献血者血浆各0.3 ml，分别和0.15 ml A2细胞混合，置4 ℃冰箱吸收40 min，当吸收后的血浆和A2细胞的反应呈阴性时，血浆中所剩抗体即为抗-A1。(2)取献血者吸收后的血浆0.1 ml，用生理盐水倍比稀释，加入等量2% A1红细胞测定抗-A1的凝集效价；(3)取献血者未吸收的血浆0.1 ml，用生理盐水倍比稀释，加入等量2% A2红细胞测定抗-A的凝集效价。结果见表2。
1.3.4 基因检测 将献血者标本快递至上海市血液中心，由血型参比实验室协助进行基因检测。
2 结果
2.1 血型血清学结果 由表1、表2看，2名献血者的血清学反应格局可归纳为以下3点：(1)红细胞A抗原减弱，B抗原正常；(2)H抗原明显增强，与O细胞反应强度相当；(3)血清凝集A1细胞，也凝集A2细胞，即血清中既存在抗-A1，又存在抗-A，均符合B(A)表型的血型血清学特点[2]，所以初步确定为B(A)表型。
2.2 基因检测结果 经上海市血液中心血型参比实验室进行基因检测，2名献血者分别具有B(A)﹡02和B(A)﹡04等位基因，所以进一步证实为B(A)表型。
3 讨论
ABO亚型在血型血清学试验中是导致正反定型不一致的主要原因之一。其中B(A)表型是AB型中非常少见的亚型，在人群中的发生频率大约在1/17万~1/58万[3]。其形成的机制，在文献[4]中有这样的描述：(1)A和B糖基转移酶在选择催化供体底物时并不是十分精确的，A和B的基因产物可能存在少部分的重叠，在合适的条件下，高活性的B转移酶能够催化Ｎ－乙酰氨基半乳糖到一种低分子质量的H类似物(2′-岩藻糖)，形成一种具有A活性的结构。(2)在某些个体的分子遗传学研究结果显示，与上述高活性B转移酶能够产生Ａ抗原的理论并不一致。有２例的核苷酸序列与正常B基因相比具有一个有意义的突变，Ser235Gly，他们是B(A)/O杂合子，他们的父亲是A1B，基因型A1/B(A)，因而B(A)表现型更像是由于底物特异性的酶转变所致，而不是由于显著增强的B转移酶活性所致。
无论B(A)表型的形成是哪一种机制，其血型血清学均表现为弱的A抗原，而血清中却含有比较强的抗-A和抗-A1抗体，极易被误定为B型而输注给B型患者，从而导致输血不良反应，给临床安全输血带来极大隐患。笔者对2例献血者血浆中的抗体活性及效价进行测定，结果证实，两者均含有在37 ℃有反应活性的抗-A抗体，所以，当其作为受血者时，只能输注O型或B型红细胞，而不能输注AB型红细胞，但需要输注血浆类制品时，则只能输注AB型，否则，同样发生输血不良反应。由此进一步证明，正确鉴定献血者的B(A)表型以及对其输血安全问题进行指导的重要性。本文中的女性献血者，在以往献血时即被误定为B型，可能因本站原来初、复检均使用丙厂家生产的单克隆试剂所致。这种试剂可能是针对一种血型抗原的单个抗原决定簇的单克隆细胞技术生产的单一抗体试剂，抗原抗体反应极为单一[5]，当某一血型抗原的基因表位上哪怕是一个功能基团或原子不同、位置差异和立体构象变化，均可能不被识别而漏检[6]。本站采用系列参考品，选择凝集效价高、亲和力强、亚型标本检出率高的甲、乙两个生产厂家的单克隆抗体试剂，分别用于体采科初检和检验科复检，从而避免了漏检情况的再次发生。另外，由于该血型具有遗传性，本站征得献血者同意，将组织相关人员对其家系进行调查，以观察B(A)基因在家族中的传递情况，并进一步就献血、用血以及遗传等相关问题给予具体指导，确实保证两个家系家庭成员的输血安全。由此也体现了本站良好的献血服务及科学严谨的工作态度。
参考文献
[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246-271.
[2]郭忠慧，向东，朱自严，等.罕见的CisAB与B(A)血型的基因型研究[[J].中华医学遗传学杂志，2004，21(4)：321-324.
[3]范亚欣，孟庆丽，潘凌子，等.1例罕见的B(A)亚型患者的血型鉴定和配血[[J].中国输血杂志，2011，24(10)：892-893.
[4] 杰夫.丹尼尔.人类血型[M].朱自严，译.北京：科学出版社，2007：27-28.
[5] 宿兰，杨世英，廉维，等.罕见的B(A)表型血清学及基因检测[J].中国输血杂志，2010，23(3)：200-202.
[6] 吴敏慧，刘毅，刘洪莉，等.ABO血型正反定型不符确认试验结果分析[J].临床输血与检验，2005，7(3)：198 -199.
(收稿日期：2012-04-28) (本文编辑：陈丹云)