【摘 要】
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目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础.方法在ABI7000
【机 构】
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南方医科大学南方医院医学中心实验科
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目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础.方法在ABI7000PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品,摸索最佳扩增条件及建立标准曲线,然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本.结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物.TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高.金牌热启动Taq酶,比较普通Taq酶而言,提高了PCR的特异性和敏感性.FQ-PCR的反应条件设定:95℃10min后95℃5s,53℃30s,40循环结束.结论通过摸索与优化实验条件,建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法.
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