【摘 要】
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目的通过基因克隆和体外转录，获得H5N1禽流感病毒血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白M（M）基因的RNA片段，为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及肘基
【基金项目】
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国家“十一五”科技重大专项(2009ZX10004-315,2008ZX10004-008);江苏省科技支撑计划(社会发展)项目(BE2009621);南京军区重点课题(07Z043);南京军区重点课题(07Z044);南京军区面上课题(08MB149)
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目的通过基因克隆和体外转录，获得H5N1禽流感病毒血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白M（M）基因的RNA片段，为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及肘基因全长开放阅读框的克隆引物，提取H5N1禽流感病毒总RNA，用RT—PCR获得相应片段，分别连接至pGEM—Teasv质粒，转化宿主菌XLl0-Gold，然后提取阳性克隆的重组质粒DNA，测序鉴定后用限制性核酸内切酶NdeI酶切线性化，用T7RNA聚合酶进行体外转录，产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度，用实时
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