观察转染RelB小干扰RNA(RelB-siRNA)对小鼠前列腺癌细胞RM-1放射治疗敏感性的影响。
方法将RM-1细胞分为4组,分别为RelB-siRNA组、空载体组、未感染组和正常对照组,分别感染RelB-siRNA慢病毒载体、空载体病毒及不感染病毒,细胞感染成功后,前3组细胞接受X线照射,用细胞克隆方法检测0、2、4、6、8 Gy剂量照射后细胞存活分数和相关参数值;上述4组细胞用Annexin V/PI流式细胞仪检测6 Gy照射剂量下细胞凋亡率,实时PCR检测6 Gy照射剂量下细胞RelB mRNA表达,Western印迹检测6 Gy照射剂量下细胞质和细胞核中RelB蛋白的表达。
结果细胞克隆结果提示,RelB-siRNA组在每个剂量点所对应的存活分数均低于空载体组和未感染组,Rel B-siRNA组的细胞平均致死剂量(D0值)、准域剂量(Dq值)、2Gy细胞存活分数(SF2值)分别为1.68、0.60、0.43,低于空载体组(1.92、3.08、0.89)和未感染组(1.93、2.76、0.84);Annexin V/PI流式细胞仪结果表明,RelB-siRNA组凋亡率为15.27%±1.62%,明显高于未感染组和空载体组的7.90%±1.50%、8.40%±0.69%(P<0.01),实时PCR结果显示,RelB-siRNA组的RelBmRNA的扩增倍数1.18±0.03,低于未感染组与空载体组2.10±0.61、1.97±0.66(P<0.01);Western印迹检测结果提示,细胞质RelB-siRNA组灰度比值为0.50±0.08,明显低于未感染组和空载体组的1.77±0.19、1.52±0.12(P<0.01);细胞质RelB-siRNA组灰度比值为0.18±0.03,明显低于未感染组和空载体组的0.61±0.12、0.54±0.13(P<0.01)。细胞质RelB-siRNA对RelB蛋白抑制率为71.8%,细胞核Rel B-siRNA对RelB蛋白抑制率为70.4%。
结论RelB-siRNA可有效抑制小鼠前列腺癌细胞RM-1中RelB表达,可明显增加RM-1对放射治疗的敏感性。