【摘 要】
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将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV),研究该基因及其编码蛋白的表达.首先将扩增的病毒E基因导入pSFV的Sp6启动子下游.用SpeⅠ酶将pSFV-E重组质粒DNA线性化
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学生命科技学院,黑龙江八一农垦大学动物科技学院
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将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV),研究该基因及其编码蛋白的表达.首先将扩增的病毒E基因导入pSFV的Sp6启动子下游.用SpeⅠ酶将pSFV-E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA.然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK21细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK21细胞.采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析.pSFV-E RNA转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的E蛋白,可与抗PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组
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