【摘 要】
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本研究根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立了产气荚膜梭菌的实时荧光PCR和RPA检测方法。特异性分析结果表明,建立的两
【机 构】
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石家庄海关; 河北省检验检疫科学技术研究院; 河北农业大学动物医学院;
【基金项目】
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原质检总局项目(2016IK107);河北省高校百名优秀创新人才支持计划(SLRC2017039);河北省现代农业产业技术体系羊产业创新团队(HBCT2018140204)
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本研究根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立了产气荚膜梭菌的实时荧光PCR和RPA检测方法。特异性分析结果表明,建立的两种检测方法特异性强,仅对产气荚膜梭菌有特异性扩增,对其它细菌均无扩增;两种方法灵敏性的检出限均为1.3 pg/μL。在人工污染模拟样品的检测中,两种方法的检出限均为1.0×10~2 CFU/mL;real-time RPA需要3～13min即可实现对所有阳性样品的检测,而real-time PCR则需要24～46 min(Ct值为17.45～33.65)。Real-time RPA方法在检测时间、操作方便性和仪器便携性方面,明显优于real-time PCR方法。本研究建立的实时荧光PCR和RPA检测方法特异性强,灵敏性高,操作方便,为实验设备装备较差的基层检测实验室和疫情突发现场产气荚膜梭菌的快速检测提供了有效的技术手段。
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