【摘 要】
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目的 对定量检测白喉类毒素(DT)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行方法学验证并初步应用.方法 以白喉抗毒素(DA)为包被抗体,大鼠抗DT抗体为检测抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG抗体为酶标抗体检测DT抗原的含量,对双抗体夹心ELISA进行方法学验证.结果 DT抗原含量在0～0.125 Lf/mL范围内反应曲线线性关系良好(r=0.996),8次重复实验的r值为0.995～0.997.该方法与破伤风类毒素(TT)抗原、百日咳类毒素(PT)抗原、百日咳丝状血凝素(FHA)抗原和百日咳黏
【机 构】
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北京智飞绿竹生物制药有限公司,北京100176;北京市细菌性疫苗工程技术研究中心
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目的 对定量检测白喉类毒素(DT)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行方法学验证并初步应用.方法 以白喉抗毒素(DA)为包被抗体,大鼠抗DT抗体为检测抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗大鼠IgG抗体为酶标抗体检测DT抗原的含量,对双抗体夹心ELISA进行方法学验证.结果 DT抗原含量在0～0.125 Lf/mL范围内反应曲线线性关系良好(r=0.996),8次重复实验的r值为0.995～0.997.该方法与破伤风类毒素(TT)抗原、百日咳类毒素(PT)抗原、百日咳丝状血凝素(FHA)抗原和百日咳黏附素(PRN)抗原无明显交叉反应,特异性较好.精密度验证变异系数为1.445％～4.431％,准确度验证回收率为91.86％～105.47％,准确检测范围为0.001953125 Lf/mL～0.125 Lf/mL,定量限为0.001953125 Lf/mL.分别采用双抗体夹心ELISA和絮状单位测定法测定6批类毒素原液中DT抗原的含量,结果显示2种检测方法呈高度相关(r=0.974),检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 双抗体夹心ELISA灵敏度高,特异性强,能准确测定DT抗原的含量,可用于白喉疫苗生产工艺过程各阶段的抗原含量测定.
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