【摘 要】
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目的 克隆葡萄球菌肠毒素O(seo)基因,构建其两种原核表达载体,表达、纯化重组蛋白SEO,并对其生物活性进行初步研究.方法 设计引物PCR获得seo成熟肽基因,将其分别克隆至原核表
【机 构】
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天津大学农业与生物工程学院,天津市出入境检验检疫局
【基金项目】
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天津市应用基础及前沿技术研究计划项目;
论文部分内容阅读
目的 克隆葡萄球菌肠毒素O(seo)基因,构建其两种原核表达载体,表达、纯化重组蛋白SEO,并对其生物活性进行初步研究.方法 设计引物PCR获得seo成熟肽基因,将其分别克隆至原核表达载体pGEX-6P-1、pET28a,转化E coli BL21、E coli BL21(DE3),重组蛋白分别经GST亲和层析、镍螫合层析纯化,利用Western blot验证重组SEO的免疫原性,MTT法测定重组SEO对ICR小鼠脾淋巴细胞的增殖作用,Caspase 3酶活及DNA电泳分析重组SEO诱导细胞凋亡的能力.结果 克降的seo基因序列与报道的序列完全相同.纯化获得重组蛋白GST-SEO和P28-SEO的表达量分别占菌体蛋白的25%和22%.免疫印迹表明两种蛋白均具有良好的免疫原性.生物活性检测表明,低剂量的肠毒素对小鼠脾淋巴细胞有刺激增殖作用,较高剂昔则会导致细胞凋亡.结论 两种重组的SEO仍具有超抗原的活性,对小鼠脾淋巴细胞具有诱导凋亡的能力.
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