【摘 要】
：
目的选用pET蛋白表达系统重组表达A、B两个亚家族的fHBP蛋白（fHBP-A和fHBP-B）,制备脑膜炎球菌蛋白疫苗,并对其进行免疫原性检测,评价该蛋白疫苗抵抗脑膜炎球菌感染的保护作用。
【基金项目】
：
上海市卫生和计划生育委员会科研课题项目(No.20174Y0016);上海市虹口区卫生和计划生育委员会科研课题项目(虹卫1704-12)
论文部分内容阅读
目的选用pET蛋白表达系统重组表达A、B两个亚家族的fHBP蛋白（fHBP-A和fHBP-B）,制备脑膜炎球菌蛋白疫苗,并对其进行免疫原性检测,评价该蛋白疫苗抵抗脑膜炎球菌感染的保护作用。方法以脑膜炎球菌Nm048（A家族）与Nm035（B家族）菌株裂解液为模版扩增目的基因fHBP-A与fHBP-B,与原核表达载体pET-24b连接,构建重组质粒pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B。分别用pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B转化大肠埃希菌,通过Western blot检测目的蛋白表达情况并用Ni2+柱层析和凝胶过滤层析进行纯化。将家兔随机分为4组,fHBP-A实验组、fHBP-B实验组、fHBP-A+fHBP-B实验组用相应重组蛋白免疫,对照组注射PBS。采用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测免疫家兔抗血清与靶菌的结合情况,通过血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价该疫苗诱导的免疫保护效果。结果 PCR扩增出约760 bp的目的基因片段,经双酶切和测序鉴定重组质粒pET-24b-fHBP-A与pET-24b-fHBP-B构建成功.重组菌经IPTG诱导后采用Ni2+柱层析和凝胶过滤层析纯化获得2个蛋白,纯度均>90%。分别用fHBP-A、fHBP-B及其混合产物免疫家兔制备的抗血清,滴度分别为1.8×104、4.9×105、4.8×105。经流式细胞术检测,不同抗原组合免疫抗血清均能与靶菌结合,血清杀菌力试验检测相应的杀菌效力均SBA>1∶8,其中fHBP-A+fHBP-B免疫抗原组抗血清的杀菌滴度较高且具有交叉反应。结论 2个亚家族的fHBP蛋白疫苗能诱导家兔产生较强的体液免疫,fHBP-A+fHBP-B具有较好的免疫原性,为脑膜炎球菌蛋白疫苗的研发奠定了基础。
其他文献
“在大海的广袤和渊博面前,你确实显得渺小单薄,但你无需为自身的‘尊容’而形秽。”(摘自《人民日报)1993年6月21日八版)这末了的“为‘尊容’而形秽”是不能达意的,“形秽
一、三维财务绩效评价指标体系设计（一）三维财务绩效评价原理迈克尔·波特在产业竞争力的研究中提出了“钻石模型”理论（如图1），认为：一国的国内经济环境对企业和产业开发竞争
近年来随着国家对环境保护的大力呼吁,作为清洁能源的核能开始快速发展,作为核能原材料的铀也进人人们视野。宝龙山铀矿床是近几年来在松辽盆地发现的--处中型可开采地浸砂岩
目的:分析呼吸阶梯性治疗对急危重症患者急诊抢救的临床效果。方法:2017年9月-2019年8月收治急危重症患者80例,随机分为两组,各40例。对照组采用一般呼吸支持方法;观察组采用
随着造船行业这几年的兴起,各造船企业的产能都在不断扩大。广船国际的造船能力也在逐年加大,由年交船1～2艘,到目前维持在年交船18～20艘,造船总吨位到70万载重吨/年,其中既有批
三连冠成就“肯尼王”1978年肯尼.罗伯茨（KennyRoberts）驾驶雅马啥赛车竟逐GP500。当时，他的主要竞争对手是铃木车队的巴利‘希恩（BarrySheene），此前已经连续获得前两届的年度骑手
随着我国社会的快速发展,我国产业结构得到了不断的优化,我国社会各界对电力的需求越来越大。随着人们日益高涨的供电需求,必须要不断地提高我国电力建筑设施的质量。目前,10
<正>"绿色贸易壁垒"已经成为横亘大连农产品出口道路之上的一道不可逾越的门槛。一、"绿色贸易壁垒"数量和内容的变化绿色贸易壁垒是指在国际贸
目的探讨无痛病房管理模式的建立及在临床工作中的实践效果。方法将骨科三病区、五病区的840例患者作为实验组,一病区、二病区的852例患者作为对照组,实验组明确组织架构,进
人们常见的“残局”,竟然幻化成了诗的意象。使之幻化,使之具形的,是某种人生经验。“找不到定势的残局”——人生经验的凝重,在某种程度上,决定着诗的意象的独特。说“某种