【摘 要】
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L-苏氨酸醛缩酶(L-Threonine aldolase,L-TA)可以催化甘氨酸和醛合成β-羟基-α-氨基酸.β-羟基-α-氨基酸具有两个手性中心,是多种手性药物的中间体.但是,游离的L-TA难以重复利用,分离纯化困难,严重阻碍了工业化应用.固定化技术可以有效解决这些问题.利用氨基树脂NAA固定化来源于Bacillus nealsonii的L-苏氨酸醛缩酶,采用戊二醛作为交联剂,经过条件优化确定最佳固定化条件为:加酶量13 U、载体量0.6g、O.4％ (V/V)戊二醛、活化时间2h、pH 8.5、3
【机 构】
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浙江大学化学工程与生物工程学院 生物工程研究所 杭州310027;浙江大学化学工程与生物工程学院 生物工程研究所 杭州310027;杭州国际科创中心 杭州311200
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L-苏氨酸醛缩酶(L-Threonine aldolase,L-TA)可以催化甘氨酸和醛合成β-羟基-α-氨基酸.β-羟基-α-氨基酸具有两个手性中心,是多种手性药物的中间体.但是,游离的L-TA难以重复利用,分离纯化困难,严重阻碍了工业化应用.固定化技术可以有效解决这些问题.利用氨基树脂NAA固定化来源于Bacillus nealsonii的L-苏氨酸醛缩酶,采用戊二醛作为交联剂,经过条件优化确定最佳固定化条件为:加酶量13 U、载体量0.6g、O.4％ (V/V)戊二醛、活化时间2h、pH 8.5、35℃、固定化5h.在此条件下,固定化酶酶活回收率为85.7％.在30℃下半衰期可达59天,为游离酶的6.5倍.将其应用于合成L-syn-对甲砜基苯丝氨酸,使用460 h后,残余酶活为79.4％.进一步开发了载体再利用策略,将失活固定化酶表面的氨基用戊二醛活化后,再与新的游离酶进行固定化,实现载体的再利用.利用该方法载体可重复利用两次,制备的固定化酶仍能使用460 h.该方法大大降低了固定化成本,为固定化L-TA的工业化应用打下坚实的基础.
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