【摘 要】
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目的构建含有突变型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(PEGFP)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础。方法通过快速定点诱变试剂盒定点
【机 构】
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解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院解放军耳鼻咽喉研究所,河北医科大学第三医院耳鼻咽喉科
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目(30801285);北京市科技新星计划(2009B34)资助
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目的构建含有突变型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(PEGFP)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础。方法通过快速定点诱变试剂盒定点突变SLC26A4基因,应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定PEGFP-SLC26A4(1517T>G)真核表达质粒。经脂质体介导转染HELA细胞系,共聚焦显微镜下观察突变型pEGFP-SLC26A4(1517T>G)真核表达质粒在HELA细胞系中的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有突变型SLC26A4基因片段,基因测序结果正确。重组突变型PEGFP-SLC26A4(1517T>G)真核表达质粒转入HELA细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,并且在细胞膜和胞浆内都有表达。结论本文成功地构建了突变型SLC26A4基因(1517T>G)和PEGFP基因的真核共表达载体,且能在HELA细胞系中表达。荧光显微镜下可见细胞膜和胞浆内都有表达,提示该突变型表达蛋白的转运功能可能发生了改变。
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