论文部分内容阅读
【摘要】 目的 建立银花感冒冲剂中绿原酸含量测定方法。方法 银花感冒冲剂样品用甲醇超声提取法，经高效液相色谱法分析，以乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）为流动相，检测绿原酸含量。结果 银花感冒冲剂中绿原酸进样量在0.064-1.28ug范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999）。绿原酸平均回收率为96.4%，RSD<1.2%。结论 高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量结果准确、可靠、稳定及安全，可作为绿原酸含量测定方法供临床应用。
【关键词】 银花感冒冲剂；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
银花感冒冲剂是临床上常用的上呼吸道感染、头痛、咽喉肿痛类非处方药，由金银花、连翘、防风等五味中药炮制加工而成，具清热解毒、凉血消肿，利咽之功效。绿原酸是金银花的主要有效成分，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用[1]。银花感冒冲剂质量标准中，无含量测定项。我们采用现代高效液相色谱法（HPLC）[2]对银花感冒冲剂中的有效成分绿原酸的含量进行了测定，现将测定原理、过程、结果报道如下。
1 仪器与试剂
Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦）；AUW 120 D型电子天平（日本岛津）；SK 8200 LH型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。银花感冒冲剂（修正药业集团股份有限公司）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为20140705；乙腈为色谱纯，水为实验室自制纯化水（电导率≤2.0μs/cm），其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Inertsil ODS-3 C18（4.6mm×250mm，5um）分析柱，乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长327nm，柱温25℃，进样量20ul。
2.3 实验溶液的制备
2.3.1 供试品溶液 取银花感冒冲剂适量，研细，精密称取细粉，置100ml量瓶中，加甲醇约70ml，超声30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3.2 对照品溶液制备 天平精密称取绿原酸对照品14.24mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液。精确量取2m1加甲醇稀释至25ml，摇匀，制成每1ml约含40ug的溶液[3]。
2.3.3 阴性对照溶液 按处方量制备缺银花成分的阴性对照样品，按上述2.3.1同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
2.4 分析线性关系 精密称取绿原酸对照品14.24mg，置于100mL避光量瓶中，加甲醇至刻度线.摇匀。分别吸取上述溶液l、2、3、5、7、10mL置于25mL量瓶中.加甲醇稀釋至刻度，摇匀，计算出送对应的各自浓度。按2.1项下色谱条件，进行测定，各样品分别进样20ul。测定峰面积，以绿原酸峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归分析，回归方程：Y=l318.3X-1.3064.r=0.9999（n=6）。绿原酸在0.064-1.280ug范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，进样20μL，重复6次，记录对照品峰面积。结果的RSD=0.19%（n=6）。表明该试验方法精密度符合要求，见表1。
2.8 样品含量测定 分别称取五袋银花感冒冲剂各3克，按2.3.1供试品溶液方法制备，采用高效液相色谱的方法进行测定，记录色谱，计算样品中绿原酸的含量，各袋绿原酸含量稳定，各袋之间无显著性差异（P>0.05）。结果见表3。
3 讨 论
3.1 银花感冒冲剂为中药复方制剂，组分复杂，经试验发现，样品的提取及前处理对绿原酸含量测定及各组分的分离影响，故对样品的提取及前处理条件进行了筛选。将样品研细，比较用甲醇超声法提取15分钟、30分钟和45分钟时绿原酸的含量。测定结果表明，超声15分钟与超声30分钟测得绿原酸含量有明显差异，超声30分钟与超声45分钟测得绿原酸含量无明显差异[6]。因此，为了保证绿原酸提取完全，我们采用了超声处理时间30min，检测波长327nm，柱温25℃，进样量20ul的测定后提取[7]。
3.2 检测波长选择 取绿原酸对照品适量加流动相使溶解，以流动相为空白，于紫外分光光度计在200-600nm波长进行扫描，绿原酸最大吸收波长327nm，流动相在327nm处无吸收，对绿原酸测定无影响，因此采用高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量，检测波长应设定为327nm[5]。
通过本文研究，高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量无干扰，并且该方法平均回收率为96.4%，RSD1.2%，精密度及重复性良好，表明本方法精密、稳定、准确重现性好。通过对五袋银花感冒冲剂含量的测定，各袋绿原酸含量稳定，各袋之间无显著性差异（P>0.05）。所以，本方法灵敏、准确、快速，重现性好，可作为银花感冒冲剂中绿原酸含量测定的常规方法，值得大力推广。
参考文献
[1] 何显忠，兰荣德.金银花的药理作用与临床应用[J].时珍国医国药，2004，15（12）：865-867.
[2] 范全民.HPLC测定维c银翘片中绿原酸的含量.现代中药研究与实践，2005，19（6）：43-45.
[3] 张丹，李章万，姜焱.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量[J].中成药，1996，16（2）：83-85.
[4] 张祥民.现代色谱分析[M].上海：复旦大学出版社，2006：2089-2090.
[5] 国家食品药品监督管理局.中国药典.第2部，2005：1068.
[6] 国家药典委员会.中国药典[S].第2部.北京：化学工业出版社，2010：152.
[7] 李喜香，杜景云，吴玲燕.HPLC法测定附炎清灌注液中绿原酸的含量[J].中药新药与临床药理，2004，15（1）：48.
【关键词】 银花感冒冲剂；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
银花感冒冲剂是临床上常用的上呼吸道感染、头痛、咽喉肿痛类非处方药，由金银花、连翘、防风等五味中药炮制加工而成，具清热解毒、凉血消肿，利咽之功效。绿原酸是金银花的主要有效成分，具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用[1]。银花感冒冲剂质量标准中，无含量测定项。我们采用现代高效液相色谱法（HPLC）[2]对银花感冒冲剂中的有效成分绿原酸的含量进行了测定，现将测定原理、过程、结果报道如下。
1 仪器与试剂
Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦）；AUW 120 D型电子天平（日本岛津）；SK 8200 LH型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。银花感冒冲剂（修正药业集团股份有限公司）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为20140705；乙腈为色谱纯，水为实验室自制纯化水（电导率≤2.0μs/cm），其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Inertsil ODS-3 C18（4.6mm×250mm，5um）分析柱，乙腈-0.4%磷酸溶液（10：90）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长327nm，柱温25℃，进样量20ul。
2.3 实验溶液的制备
2.3.1 供试品溶液 取银花感冒冲剂适量，研细，精密称取细粉，置100ml量瓶中，加甲醇约70ml，超声30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10ml置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3.2 对照品溶液制备 天平精密称取绿原酸对照品14.24mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备溶液。精确量取2m1加甲醇稀释至25ml，摇匀，制成每1ml约含40ug的溶液[3]。
2.3.3 阴性对照溶液 按处方量制备缺银花成分的阴性对照样品，按上述2.3.1同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
2.4 分析线性关系 精密称取绿原酸对照品14.24mg，置于100mL避光量瓶中，加甲醇至刻度线.摇匀。分别吸取上述溶液l、2、3、5、7、10mL置于25mL量瓶中.加甲醇稀釋至刻度，摇匀，计算出送对应的各自浓度。按2.1项下色谱条件，进行测定，各样品分别进样20ul。测定峰面积，以绿原酸峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归分析，回归方程：Y=l318.3X-1.3064.r=0.9999（n=6）。绿原酸在0.064-1.280ug范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，进样20μL，重复6次，记录对照品峰面积。结果的RSD=0.19%（n=6）。表明该试验方法精密度符合要求，见表1。
2.8 样品含量测定 分别称取五袋银花感冒冲剂各3克，按2.3.1供试品溶液方法制备，采用高效液相色谱的方法进行测定，记录色谱，计算样品中绿原酸的含量，各袋绿原酸含量稳定，各袋之间无显著性差异（P>0.05）。结果见表3。
3 讨 论
3.1 银花感冒冲剂为中药复方制剂，组分复杂，经试验发现，样品的提取及前处理对绿原酸含量测定及各组分的分离影响，故对样品的提取及前处理条件进行了筛选。将样品研细，比较用甲醇超声法提取15分钟、30分钟和45分钟时绿原酸的含量。测定结果表明，超声15分钟与超声30分钟测得绿原酸含量有明显差异，超声30分钟与超声45分钟测得绿原酸含量无明显差异[6]。因此，为了保证绿原酸提取完全，我们采用了超声处理时间30min，检测波长327nm，柱温25℃，进样量20ul的测定后提取[7]。
3.2 检测波长选择 取绿原酸对照品适量加流动相使溶解，以流动相为空白，于紫外分光光度计在200-600nm波长进行扫描，绿原酸最大吸收波长327nm，流动相在327nm处无吸收，对绿原酸测定无影响，因此采用高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量，检测波长应设定为327nm[5]。
通过本文研究，高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量无干扰，并且该方法平均回收率为96.4%，RSD1.2%，精密度及重复性良好，表明本方法精密、稳定、准确重现性好。通过对五袋银花感冒冲剂含量的测定，各袋绿原酸含量稳定，各袋之间无显著性差异（P>0.05）。所以，本方法灵敏、准确、快速，重现性好，可作为银花感冒冲剂中绿原酸含量测定的常规方法，值得大力推广。
参考文献
[1] 何显忠，兰荣德.金银花的药理作用与临床应用[J].时珍国医国药，2004，15（12）：865-867.
[2] 范全民.HPLC测定维c银翘片中绿原酸的含量.现代中药研究与实践，2005，19（6）：43-45.
[3] 张丹，李章万，姜焱.HPLC测定金银花、茵陈及其10种中成药中绿原酸的含量[J].中成药，1996，16（2）：83-85.
[4] 张祥民.现代色谱分析[M].上海：复旦大学出版社，2006：2089-2090.
[5] 国家食品药品监督管理局.中国药典.第2部，2005：1068.
[6] 国家药典委员会.中国药典[S].第2部.北京：化学工业出版社，2010：152.
[7] 李喜香，杜景云，吴玲燕.HPLC法测定附炎清灌注液中绿原酸的含量[J].中药新药与临床药理，2004，15（1）：48.