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摘 要：榉树在秋季色彩艳丽、是观赏价值高的园林树种。为了建立榉树无性繁殖体系，探讨榉树叶片愈伤组织的诱导，以榉树叶片作为外植体，采用75%乙醇（30s）、2%次氯酸钠溶液（25min）消毒，接种于含不同激素种类及浓度的MS培养基上诱导愈伤组织，观察统计培养结果。结果表明：榉树叶片作为外植体可以启动愈伤组织的形成。在诱导培养基中，BA浓度为0.5mg/L，2，4-D浓度0.2mg/L的条件下，愈伤组织的诱导率最高。为榉树无性繁殖体系建立奠定基础。
关键词：榉树；外源激素；愈伤组织；诱导
中图分类号：S-3 文献标识码：A
DOI：10.19754/j.nyyjs.20190530069
基金项目：宿迁市重点研发计划（项目编号：L201702）；宿迁市科技计划项目（项目编号：Z2018219）；江苏省宿迁学院大学生创新项目（项目编号：2018XSJ052）
*为本文通讯作者 榉树（Zelkova schneideriana）名称众多，又被称为毛脉榉、红榉、大叶榉、黄榉等。榉树分类上为榆科（Ulmaceae）榉树属（Zelkova），是我国重点保护植物[1]。榉树是亚热带常绿阔叶树种，在环境保护中具有重要作用[2]。榉树因其株形高大、枝干优美，在秋季色彩艳丽，是观赏价值高的园林树种[3]。榉树也是良好用材树种[4]。近年来，榉树野生资源稀缺，对于榉树的保护与开发利用尤为重要[5]。本文试验通过对榉树叶片在不同外源激素种类以及浓度配比的培养基上培养，从而筛选出榉树叶片愈伤组织诱导最佳培养基，为进一步研究榉树无性繁殖提供试验依据。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
取自校内栽培榉树。以叶片作为组织培养外植体。
1.2 培养基配方
本试验采用L9（34）正交设计，BA，2，4-D，NAA 3因素3水平试验（表1）。每种培养基的配方如（表2）。
1.3 试验方法
接种前，将榉树叶片外植体冲洗干净，吸水纸吸干水分后在超净台上用浓度为75%的酒精浸泡30s，再用浓度为2%的Naclo浸泡25min消毒。然后无菌水洗3次，每次1min。将嫩叶分割成5mm×5mm的小块，置于愈伤组织诱导培养基中，每瓶5片，每种培养基接种6瓶。培养条件为：培养温度（25±1）℃[6]。光照培养16h，黑暗培养8h。
1.4 数据统计及分析
采SPSS、Microsoft Excel软件进行分析和作图。
2 试验结果与分析
2.1 正交试验结果
结果如表3所示。3个因素对榉树愈伤组织诱导影响的主次关系依次是B>A>C，即2，4-D>BA>NAA。根据k值各因素对榉树愈伤组织诱导的影响：BA表现为 0.5mg/L>4mg/L>2mg/L；2，4-D表现为0.2mg/L>0.5mg/L>1 mg/L；NAA表现为 0mg/L> 0.1mg/L> 0.5mg/L。由此可得最优水平组合为：A1B1C1，即0.5mg/LBA 0.2mg/L2，4-D。
2.2 不同浓度的BA对榉树愈伤组织诱导的影响
BA浓度在0.5mg/L时出愈率高，有光泽，生长性良好。当BA浓度在2mg/L时，出愈率低，顏色较暗，生长差（图1）。当BA浓度在4mg/L时出愈率次于0.5mg/L时（图1）。
2.3 不同浓度2，4-D对榉树愈伤组织诱导的影响
从图2可得：在2，4-D浓度为0.2mg/L 时比其它2种诱导培养基出愈情况好，愈伤组织呈翠绿色，在2，4-D浓度为0.5mg/L 时次之，2，4-D浓度为1mg/L 时出愈最差。
2.4 不同浓度NAA对榉树愈伤组织的诱导的影响
NAA对榉树愈伤组织的诱导由下图NAA的效应曲线图（图3）可知，无NAA时，诱导率最高，愈伤组织生长好，具有光泽，随着NAA浓度的升高愈伤组织长势逐渐降低，颜色变得暗淡，无光泽。
3 讨论与结论
榉树无性繁殖技术已有很多人在研究。钟飞霞利用榉树小苗的嫩茎、叶片作为外植体，成功诱导出愈伤组织[7]。金晓玲以嫩枝作为外植体，在MS基本培养基上，筛选出了诱导榉树芽萌发最佳培养基[8]。刘雪梅等发现适合榉树不定芽诱导的培养基[9]；刘海龙发现幼嫩叶片诱导愈伤组织最佳配方[10]等。榉树叶片愈伤组织最佳培养基为MS 0.5mg/LBA 0.2mg/L2，4-D，出愈率为96.7%。
参考文献
[1] 中国树木志编委会.中国主要树种造林技术（上册）[M].北京：农业出版社，1976：580-583.
[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第二十二卷）[M].北京：科学出版社，1999：382-386.
[3] 茹雷鸣，张燕雯，姜卫兵.榉树在园林绿化中的应用[J].广东园林，2007（6） ：50-52.
[4] 江苏省植物研究所.江苏植物志：下册[M].南京：江苏科学技术出版社，1982：63-64.
[5] 汪灵丹，张日清.榉树的研究进展[J].广西林业科学，2005，34（4）：188-191.
[6] 彭尽晖，吕长平，周晨.四季桂愈伤组织诱导与继代培养[J].湖南农业大学学报（自然科学版），2003（02）：131-133.
[7] 钟飞霞.榉树无性繁殖技术研究[D].长沙：中南林业科技大学，2010：33-35.
[8] 金晓玲，何平，张日清.榉树茎尖的培养[J].中南林学院学报，2005，25（1）：38-41.
[9] 刘雪梅，罗雪梅，王征，等.直接器官发生途径的榉树微繁体系建立[J].湖南师范大学自然科学学报，2014，37（2）：17-21.
[10] 刘海龙，张日清，汪灵丹，等.榉树叶器官再生植株技术[J].广西林业科学，2013， 42（3）：231-233.
关键词：榉树；外源激素；愈伤组织；诱导
中图分类号：S-3 文献标识码：A
DOI：10.19754/j.nyyjs.20190530069
基金项目：宿迁市重点研发计划（项目编号：L201702）；宿迁市科技计划项目（项目编号：Z2018219）；江苏省宿迁学院大学生创新项目（项目编号：2018XSJ052）
*为本文通讯作者 榉树（Zelkova schneideriana）名称众多，又被称为毛脉榉、红榉、大叶榉、黄榉等。榉树分类上为榆科（Ulmaceae）榉树属（Zelkova），是我国重点保护植物[1]。榉树是亚热带常绿阔叶树种，在环境保护中具有重要作用[2]。榉树因其株形高大、枝干优美，在秋季色彩艳丽，是观赏价值高的园林树种[3]。榉树也是良好用材树种[4]。近年来，榉树野生资源稀缺，对于榉树的保护与开发利用尤为重要[5]。本文试验通过对榉树叶片在不同外源激素种类以及浓度配比的培养基上培养，从而筛选出榉树叶片愈伤组织诱导最佳培养基，为进一步研究榉树无性繁殖提供试验依据。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
取自校内栽培榉树。以叶片作为组织培养外植体。
1.2 培养基配方
本试验采用L9（34）正交设计，BA，2，4-D，NAA 3因素3水平试验（表1）。每种培养基的配方如（表2）。
1.3 试验方法
接种前，将榉树叶片外植体冲洗干净，吸水纸吸干水分后在超净台上用浓度为75%的酒精浸泡30s，再用浓度为2%的Naclo浸泡25min消毒。然后无菌水洗3次，每次1min。将嫩叶分割成5mm×5mm的小块，置于愈伤组织诱导培养基中，每瓶5片，每种培养基接种6瓶。培养条件为：培养温度（25±1）℃[6]。光照培养16h，黑暗培养8h。
1.4 数据统计及分析
采SPSS、Microsoft Excel软件进行分析和作图。
2 试验结果与分析
2.1 正交试验结果
结果如表3所示。3个因素对榉树愈伤组织诱导影响的主次关系依次是B>A>C，即2，4-D>BA>NAA。根据k值各因素对榉树愈伤组织诱导的影响：BA表现为 0.5mg/L>4mg/L>2mg/L；2，4-D表现为0.2mg/L>0.5mg/L>1 mg/L；NAA表现为 0mg/L> 0.1mg/L> 0.5mg/L。由此可得最优水平组合为：A1B1C1，即0.5mg/LBA 0.2mg/L2，4-D。
2.2 不同浓度的BA对榉树愈伤组织诱导的影响
BA浓度在0.5mg/L时出愈率高，有光泽，生长性良好。当BA浓度在2mg/L时，出愈率低，顏色较暗，生长差（图1）。当BA浓度在4mg/L时出愈率次于0.5mg/L时（图1）。
2.3 不同浓度2，4-D对榉树愈伤组织诱导的影响
从图2可得：在2，4-D浓度为0.2mg/L 时比其它2种诱导培养基出愈情况好，愈伤组织呈翠绿色，在2，4-D浓度为0.5mg/L 时次之，2，4-D浓度为1mg/L 时出愈最差。
2.4 不同浓度NAA对榉树愈伤组织的诱导的影响
NAA对榉树愈伤组织的诱导由下图NAA的效应曲线图（图3）可知，无NAA时，诱导率最高，愈伤组织生长好，具有光泽，随着NAA浓度的升高愈伤组织长势逐渐降低，颜色变得暗淡，无光泽。
3 讨论与结论
榉树无性繁殖技术已有很多人在研究。钟飞霞利用榉树小苗的嫩茎、叶片作为外植体，成功诱导出愈伤组织[7]。金晓玲以嫩枝作为外植体，在MS基本培养基上，筛选出了诱导榉树芽萌发最佳培养基[8]。刘雪梅等发现适合榉树不定芽诱导的培养基[9]；刘海龙发现幼嫩叶片诱导愈伤组织最佳配方[10]等。榉树叶片愈伤组织最佳培养基为MS 0.5mg/LBA 0.2mg/L2，4-D，出愈率为96.7%。
参考文献
[1] 中国树木志编委会.中国主要树种造林技术（上册）[M].北京：农业出版社，1976：580-583.
[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第二十二卷）[M].北京：科学出版社，1999：382-386.
[3] 茹雷鸣，张燕雯，姜卫兵.榉树在园林绿化中的应用[J].广东园林，2007（6） ：50-52.
[4] 江苏省植物研究所.江苏植物志：下册[M].南京：江苏科学技术出版社，1982：63-64.
[5] 汪灵丹，张日清.榉树的研究进展[J].广西林业科学，2005，34（4）：188-191.
[6] 彭尽晖，吕长平，周晨.四季桂愈伤组织诱导与继代培养[J].湖南农业大学学报（自然科学版），2003（02）：131-133.
[7] 钟飞霞.榉树无性繁殖技术研究[D].长沙：中南林业科技大学，2010：33-35.
[8] 金晓玲，何平，张日清.榉树茎尖的培养[J].中南林学院学报，2005，25（1）：38-41.
[9] 刘雪梅，罗雪梅，王征，等.直接器官发生途径的榉树微繁体系建立[J].湖南师范大学自然科学学报，2014，37（2）：17-21.
[10] 刘海龙，张日清，汪灵丹，等.榉树叶器官再生植株技术[J].广西林业科学，2013， 42（3）：231-233.