人可溶性TNF受体（sTNFRI）在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定

来源 :中国免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：windforce9811

【摘要】

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目的:构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体,并在大肠杆菌中高效表达.方法:用RT-PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段,将其插入到表达载体pET-28a,并转入大肠杆菌进行表达

【作者】

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叶飞李卓娅尹丙姣龚非力姜晓丹冯玮徐勇熊平

【机构】

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华中科技大学同济医学院免疫学教研室

【出处】

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中国免疫学杂志

【发表日期】

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2002年11期

【关键词】

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人可溶性TNF受体大肠杆菌表达活性鉴定胞毒效应 Soluble TNF receptorGene expressionCytotoxicity

【基金项目】

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国家自然科学基金

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目的:构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体,并在大肠杆菌中高效表达.方法:用RT-PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段,将其插入到表达载体pET-28a,并转入大肠杆菌进行表达.结果:在IPTG诱导下,转入外源基因的大肠杆菌BL-21可高效表达sTNFRI蛋白,SDS-PAGE显示在27 KD处有一特异表达条带,其表达量占菌体蛋白总量的31%.纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L929细胞的胞毒效应;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合.结论:通过基因工程技术获

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