【摘 要】
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目的:探讨两种不同的干预ERRα基因的表达和活性策略对人多发性骨髓瘤细胞株MM.1S凋亡的影响.方法:第一种策略是设计并构建靶向人ERRα基因的shRNA慢病毒载体,利用293T细胞包装慢病毒后感染骨髓瘤细胞株MM.1S,经嘌呤霉素筛选得到敲低ERRα的稳转细胞株.另一种策略是使用ERRα的特异性反向激动剂XCT790处理细胞.流式细胞术分析敲低ERRα对MM.1S细胞凋亡的影响,Western blot检测敲低ERRα后凋亡相关蛋白的表达情况.结果:成功构建敲低ERRα的shRNA表达载体,获得ERRα
【机 构】
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苏州大学医学部造血干细胞移植研究所,苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,血液学协同创新中心,江苏苏州215000
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目的:探讨两种不同的干预ERRα基因的表达和活性策略对人多发性骨髓瘤细胞株MM.1S凋亡的影响.方法:第一种策略是设计并构建靶向人ERRα基因的shRNA慢病毒载体,利用293T细胞包装慢病毒后感染骨髓瘤细胞株MM.1S,经嘌呤霉素筛选得到敲低ERRα的稳转细胞株.另一种策略是使用ERRα的特异性反向激动剂XCT790处理细胞.流式细胞术分析敲低ERRα对MM.1S细胞凋亡的影响,Western blot检测敲低ERRα后凋亡相关蛋白的表达情况.结果:成功构建敲低ERRα的shRNA表达载体,获得ERRα敲低的稳转细胞株;靶向ERRα的shRNA病毒感染和特异性反向激动剂均能显著下调ERRα在骨髓瘤细胞MM.1S中的表达水平;敲低 ERRα能诱导MM.1S细胞发生显著凋亡并且使凋亡相关蛋白cleaved PARP表达水平升高;ERRα的特异性反向激动剂XCT790处理骨髓瘤细胞MM.1S与敲低ERRα导致的效应一致.结论:通过shRNA靶向敲低ERRα或使用特异性反向激动剂XCT790抑制ERRα的表达均能诱导MM.1S细胞发生显著凋亡,提示ERRα对骨髓瘤细胞的生存有重要影响.
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