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目的
构建靶向神经纤毛蛋白质1(Neuropilin–1，NRP–1)的短发卡RNA(shRNA)表达载体，观察NRP–1对人鼻咽癌细胞系CNE–2Z细胞生长增殖的影响。通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果。
方法根据NRP–1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR–1基因，并含荧光素标记的shRNA真核表达载体(pSilencer–shRNA1、pSilencer–shRNA2和pSilencer–shRNA3)；以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE–2Z细胞及裸鼠瘤体内，于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况；以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性；实时定量PCR(RT–PCR)检测NRP–1基因在mRNA水平表达的抑制作用；Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果。体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。
结果质粒成功转染CNE–2Z细胞及瘤体，可见大量的癌细胞表达绿色荧光。MTT实验证明NRP–1 shRNA抑制CNE–2Z细胞的生长增殖；RT–PCR结果表明NP–1的mRNA表达降低；Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调；体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后，转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制[(0.599±0.002)比(1.141±0.013)、(1.165±0.308)cm3，均P<0.05]，抑瘤率为48.6%。
结论表达shRNA的NRP–1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞，沉默NRP–1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖。为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础。