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摘 要：本试验主要探讨在无抗日粮基础上，添加外源性菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡生产性能、屠宰性能、消化性能的影响。试验选用800只817小型肉鸡，随机分为4个处理，分别作为对照组、空白组、菌酶复合物组和复合植物精油组。试验结果：无抗日粮中817小型肉鸡生产性能、消化性能下降，在无抗日粮中添加菌酶复合物和复合植物精油能够减少肉鸡死亡，降低料肉比，对817小型肉鸡屠宰性能无显著影响（P>0.05），且能够降低817小型肉鸡血清中的总胆固醇和低密度脂蛋白，但是并未达到显著水平（P>0.05）;菌酶复合物处理能够显著增加817小型肉鸡肠道内的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性（P<0.05），顯著增加肠道内有益菌数量（P<0.05）;复合植物精油处理对817小型肉鸡肠道消化酶活性和有益菌数量有积极性作用，但效果不显著（P>0.05）。结果表明，外源性菌酶复合物和复合植物精油的添加能够提高817小型肉鸡的生产性能，提高肠道消化酶活性及改善肠道内环境，是在减抗替抗产品中较理想的选择。
关键词：无抗日粮;817小型肉鸡;菌酶复合物;复合植物精油
随着人们对食品安全认识的提高以及抗生素在使用过程中出现的药物残留与细菌耐药性增强等负面因素，国家在严格控制动物生产中抗生素的种类与用量[1]。2020年7月1日我国已禁止向饲料中添加促生长类药物饲料添加剂。当前探索毒副作用小的抗生素替代物来减少抗生素的使用，甚至在养殖过程中做到无抗生素使用已经成为动物营养的热点，尤其是在肉鸡养殖领域。
菌酶复合物中有益菌能够在肠道内定殖并完成增殖，从而影响肠道内环境，而其中的各种复合酶能够在不同的肠道进行释放，作用于其他消化底物，提供动物对饲料中营养物质消化率[2]。丁酸作为一种短链脂肪酸，能够降低消化道pH值，增加肠道内蛋白酶活性，增加动物对饲料中营养物质利用率[3]。植物精油是从植物中提取的天然、挥发性和芳香性化合物的混合物，具有调节肠道菌群、提高动物免疫力和生产性能的作用[4]。
本试验为研究菌酶复合物与复合植物精油在817小型肉鸡生产中的使用效果，通过测定肉鸡生长性能、肠道酶活性、肠道菌群等相关指标，探讨在玉米-豆粕型817小型肉鸡无抗生素日粮基础上添加抗生素替代品的应用效果，为在动物生产中替抗与减抗提供科学理论依据与技术支持。
1 材料与方法
1.1 试验材料与动物分组
1.1.1 试验材料 抗生素选用亚甲基水杨酸杆菌肽：有效含量15%，添加量为每吨饲料添加200 g，购自成都思来生物科技有限公司。
菌酶复合物由青岛根源生物科技有限公司提供，主要为丁酸梭菌（2.3×107 CFU/g）、乳酸杆菌（1.9×107 CFU/g）、双歧杆菌（3.0×107 CFU/g）、枯草芽孢杆菌（1.6×108 CFU/g）、木聚糖酶（20000 U/g）、β-葡聚糖酶（15000 U/g）、β-甘露聚糖酶（4000 U/g）、纤维素酶（500 U/g）、果胶酶（2000 U/g）、蛋白酶（8000 U/g）和淀粉酶（3000 U/g），菌酶复合物在饲料中的添加量为250 mg/kg。
复合植物精油由丁酸钠（由杭州康德权饲料有限公司提供）与百里香酚（含量4.0%）、香芹酚（含量8.0%）、肉桂醛（含量4.0%）、丁香酚（含量2.0%）混合组成，复合植物精油在饲料中的添加量为250 mg/kg。
1.1.2 试验动物分组 试验选用800只817小型肉鸡，所用雏鸡为同一孵化场同一批次鸡苗，鸡舍内通风、光照、温度等管理程序一致。4个处理组，每个处理组200只817小型肉鸡。其中第1组作为对照组，饲喂含有亚甲基水杨酸杆菌肽的肉鸡饲料;第2组作为空白对照组，饲喂不含有任何药物的肉鸡饲料;第3组作为试验组Ⅰ组，饲喂只添加菌酶复合物的肉鸡饲料，剂量为250 mg/kg;第4组作为试验组Ⅱ组，饲喂只添加复合植物精油的肉鸡饲料，剂量为250 mg/kg。
1.2 试验日粮 817小型肉鸡日粮组成为玉米-豆粕型日粮，配方组成及营养水平见表1所示。
1.3 饲养管理 进雏鸡前，对鸡舍内的墙壁、地面以及饮食器具进行清洗消毒，然后对鸡舍和所有器具进行熏蒸消毒。试验鸡采用笼养，自由采食，采用暖风炉供暖。1～5 d房间温度控制在30～33 ℃，之后舍内温度每天以0.5 ℃逐渐下调，直到最终温度为21～23 ℃左右。饲养初期采用24 h光照，自第6天起，随着饲养日龄增加，每日减少光照时间0.5 h，到每日光照时间22 h后维持恒定，直至出鸡。每天对鸡舍进行清扫，定期清洗饮水管道，并及时通风换气，保证鸡舍内环境卫生良好。
1.4 测定指标和方法
1.4.1 生产性能与经济效益指标 记录整个试验过程中每组鸡的总饲料消耗量，同时记录每天鸡的死亡数量。42 d鸡只出栏时，记录出栏鸡的数量与重量，计算试验过程中料肉比及养殖期间死淘率。
料肉比（F/G）=平均日采食量/平均日增重×100%
死淘率=1-出栏鸡数/进鸡总数×100%
1.4.2 屠宰性能指标 第42天从各处理组中选取30只试验鸡先称重，随后进行胴体性状评定，方法参照中华人民共和国农业行业标准NY/T823-2004进行[3]，主要测定指标有屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。
1.4.3 血清指标 第42天，试验鸡屠宰过程中，收集血液10 mL，然后静置，待血液凝固之后用离心机离心10 min，分离血清，分装于1.0 mL离心管，使用生化分析仪分析血清中的葡萄糖、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白。 1.4.4 消化道淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性 在屠宰试验进行的同时，分别从腺胃、肌胃、十二指肠、空肠中分离相关食糜装入离心管中，冰箱冷冻，用于测定消化道酶活性。
消化酶样本前处理：冰冻的腺胃、肌胃、十二指肠和空肠的食糜，在室温下自然解冻，取少量食糜，加入双蒸水，按食糜质量（g）：水体积（mL）=1∶5，摇匀后置于4 ℃离心机3000 r/min离心5 min，取上清液测定蛋白酶活性。同时测定回肠内食糜的脂肪酶和蛋白酶活性，使用BCA方法测定上清液蛋白含量。
采用试剂盒测定酶活，试剂盒购自南京建成生物有限公司（具体步骤参考南京建成蛋白酶試剂盒说明书）。
1.4.5 肠道菌群变化 在屠宰试验进行的同时，分别从空肠和盲肠中分离相关食糜，冰箱冷冻，用于测定肠道菌群。
肠道菌群样品前处理：取出保存于-80 ℃冰箱的空肠和盲肠食糜样品，在无菌工作台上贴近肠壁取空肠、盲肠内容物0.5 g，加入灭菌生理盐水4.5 mL稀释成为10-1悬浊液，漩涡震荡3min，离心5 min，吸取0.5 mL上清液加入盛有4.5 mL灭菌生理盐水试管中稀释至10-2悬浊液，按照此方法再依次将空肠和盲肠内容物稀释至10-3、10-4、10-5、10-6、10-7用于涂板培养。
大肠杆菌计数：采用麦康凯培养基（MacConkey琼脂）采用37 ℃恒温培养箱培养24 h后通过平板计数法，菌落计数用lg（cfu/g）食糜表示。
乳酸杆菌计数：采用Rogasa琼脂培养基37 ℃恒温培养箱冲氮气进行厌氧培养24 h后通过平板计数法，菌落计数用lg（cfu/g）食糜表示。
1.5 数据分析 试验数据先用Microsoft Excel作初步处理，然后用SPSS17.0统计软件进行差异显著性检验，以P<0.05表示差异达到显著水平。
2 试验结果
2.1 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡生产性能的影响 结果见表2所示。
表2结果显示，使用菌酶复合物和复合植物精油能够减少817小型肉鸡养殖饲养过程中的死亡数，增加了肉鸡成活率，但效果要低于亚甲基水杨酸杆菌肽组;相比于空白组，使用菌酶复合物（试验Ⅰ组）和复合植物精油（试验Ⅱ组）均提高817小型肉鸡的生产性能，增加鸡只体重采食量，降低817小型肉鸡的料肉比，两个试验组相比较，复合植物精油组添加效果要略微好于菌酶复合物组，但两者之间差异不大（P>0.05）。
2.2 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡屠宰性能的影响 结果见表3所示。
表3结果显示：相比于对照组，空白处理组并未显著影响817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。相比于对照组与空白组，使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组并未显著影响817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组之间对817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率和肌胃重无显著影响（P>0.05）。表3还显示，使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组有降低817小型肉鸡腹脂率的作用，但是两者之间差异不显著（P>0.05）。
2.3 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡血清指标的影响 结果见表4所示。
表4结果显示：与对照组相比，空白处理组对817小型肉鸡血清中的葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白无显著影响（P>0.05）;使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组对817小型肉鸡血清中的葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白无显著影响（P>0.05）;试验Ⅰ组和试验Ⅱ组两者对817小型肉鸡血清指标无显著影响（P>0.05）。相比于对照组和空白组，使用复合植物精油的试验Ⅱ组表现出降低血清中的总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的能力，但是试验Ⅰ组和试验Ⅱ组两者之间差异并不显著（P>0.05）。
2.4 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道酶活性的影响 结果见表5所示。
表5结果显示，空白组817小型肉鸡不同肠道的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活和空肠蛋白酶活比对照组低，回肠脂肪酶和回肠淀粉酶活性略高于对照组，但两者之间差异不显著（P>0.05）。菌酶复合物试验组能显著增加817小型肉鸡的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活、空肠蛋白酶活、回肠脂肪酶酶活和回肠淀粉酶酶活（P<0.05），复合植物精油虽能增加817小型肉鸡的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活、空肠蛋白酶活、回肠脂肪酶酶活和回肠淀粉酶酶活，但并未达到显著水平（P>0.05）。
2.5 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡肠道菌群的影响 结果见表6所示。
由表6可以看出，与对照组相比，空白组817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠大肠杆菌含量增加，但是两者之间差异不显著（P>0.05）;使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组均能降低817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠内大肠杆菌含量，但差异不显著（P>0.05）;而试验Ⅰ组和试验Ⅱ组相比，在空肠、盲肠和直肠内大肠杆菌含量方面差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，空白组817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠内乳酸杆菌含量增加，但是两者之间差异不显著（P>0.05）;相比于空白组，菌酶复合物试验组能够显著增加817小型肉鸡空肠盲肠和直肠内乳酸杆菌数量（P<0.05）;复合植物精油虽能够增加817小型肉鸡空肠盲肠和直肠内乳酸杆菌数量，但差异并不显著（P>0.05）;菌酶复合物处理组和复合植物精油处理组空肠、盲肠和直肠乳酸杆菌含量差异不显著（P>0.05）。 3 讨论
3.1 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡生产性能和屠宰性能的影响 付水光的研究[5]表明，复合酶制剂能够增加肉鸡的生长性能，表现为单日增重比对照组高4 g。李响研究[6]发现：益生菌（主要成分为枯草芽孢杆菌，有效含量为2.0×109 CFU/g）能够提高肉鸡的生长性能，酶制剂（主要成分是木聚糖酶和β-葡聚糖酶）能够提高肉鸡的生长性能。张杏莉的研究[7]结果表明，使用精油（1.7%的百里香酚与1.0%的香芹酚）能够提高肉鸡的生长性能与屠宰性能。张文静研究[8]指出，百里香酚、丁香酚、香芹酚、柠檬烯、柠檬醛、肉桂醛形成的复合植物精油能够增加肉鸡的生产性能。以上研究结论与本文的研究结果相一致，但是本文的结果显示，菌酶复合物和复合植物精油对于817小型肉鸡生长并未完全达到抗生素的作用效果。在屠宰性能方面，孙锡风等研究[9]结果表明，复合益生菌（主要成分为枯草芽孢杆菌和乳酸菌）对改善胸肌率和腿肌率有积极作用，这与本研究结果相一致，同时益生菌能够显著降低腹脂率，造成这种现象的原因可能与试验动物差异性或两种试验饲料中粗脂肪的含量存在差异有关。
3.2 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡血清指标的影响 在817小型肉鸡血清指标方面，许运岑的研究[10]表明，益生菌（主要成分是枯草芽孢杆菌）能够降低血清中的总胆固醇，而本研究结果表明益生菌降低血清的总胆固醇，但是没有达到显著水平，分析原因可能与益生菌的菌株差异与使用剂量差异有关。复合菌酶与复合植物精油降低血清中的总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，可能与复合菌酶与复合植物精油提高817小型肉鸡整体健康情况有关，具体降低的机制还需要进一步研究。
3.3 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道酶活性的影响 肉鸡对饲料中营养物质的消化是借助于肠道内的消化酶完成的，因此外源性复合酶（淀粉酶、脂肪酶与蛋白酶）的添加能够增加肠道内淀粉酶、脂肪酶与蛋白酶的含量，从而增加消化性能[5，6]，这也与之前的研究结果相一致。而复合植物精油增加消化道内酶的活性，可能与肠道内环境的改善有关，因为丁酸钠具有改善肠道微生物组成、缓解炎症、提高免疫力以及促进肠道屏障功能[6]，植物精油具有增强抗菌免疫作用、维持肠道完整性、改善抗氧化性能的作用[4]，肠道功能的改善会增加消化酶的生成量，进而会增加消化道酶活，这与本文的研究结果相一致。另贾凤等的研究[3]亦表明，薄膜丁酸钠能够增加肉鸭消化道内消化酶活性。
3.4 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道菌群的影响 有研究指出外源性菌酶复合物的添加能够减少肉鸡肠道内有害微生物如大肠杆菌的数量，增加肉鸡肠道内有益微生物（如乳酸杆菌、双歧杆菌）[5]的数量，这与本文的研究结果相一致。丁酸钠的添加可以提高肠道健康，进而辅助提高817小型肉鸡肠道中有益菌的数量[3，6];复合植物精油增加817小型肉鸡肠道消化道菌群中有益菌的数量，可能与植物精油的缓解炎症和机体提高免疫力有关[4，7]，另外也可能与复合植物精油改善肉鸡肠道上皮屏障功能有关[11]，这些结论也与本文的研究结果相一致。具体微生物数量的变化还需要从微生物对肠道内环境变化的适应性以及微生物定殖等方面展开详细研究。
4 结论
外源性菌酶复合物和复合植物精油的添加能够提高817小型肉鸡的生产性能，提高肠道消化酶活性及改善肠道内环境，是在减抗替抗产品中较理想的选择。
参考文献：
[1] 朱碧泉.有机酸对肉鸡生产性能及微生态效应的影响[D].雅安：四川农业大学，2004.
[2] 苗朝华，敖志刚，林伟忠.三黄鸡饲喂固态发酵多酶复合物的效果研究[J].饲料广角，2006（10）：49-50.
[3] 贾凤，刘燕，韦强，等.包膜丁酸钠对肉鸭肠道黏膜形态和消化酶活性的影响[J].浙江农业学报，2014，26（03）：570-575.
[4] 燕磊，朱正鹏，李星晨，等.植物精油在肉鸡生产中应用的研究进展[J].中國家禽，2017，39（06）：45-48.
[5] 付水广，李红美，吴华东.复合酶制剂对肉鸡生产性能的影响[J].江西畜牧兽医杂志，2019（01）：19-23.
[6] 李响，关鹏，栾超，等.丁酸钠、益生菌和酶制剂对白羽肉鸡生长性能、肠道健康及肠道微生物组成的影响[J].饲料研究，2020，43（07）：130-134.
[7] 张杏莉.“精油+有机酸”微囊包被制剂在肉鸡生产中的应用研究[D].福州：福建农林大学，2016.
[8] 张文静.复合植物精油提高肉仔鸡生长性能和抗病力的初步研究与应用[D].长春：吉林大学，2017.
[9] 孙锡风，蒋万春，白莹，等.复合益生菌对肉鸡生产性能、屠体性能及养分表观利用率的影响[J].中国饲料，2017（04）：17-21.
[10] 许运岑，吕超，于曦，等.枯草芽孢杆菌对AA+商品肉鸡生产性能、血清生化指标及经济效益的影响[J].饲料工业，2017，38（24）：32-35.
[11] 杜恩存.百里香酚和香芹酚对肉仔鸡肠上皮屏障和免疫功能的调节作用[D].北京：中国农业大学，2016.
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关键词：无抗日粮;817小型肉鸡;菌酶复合物;复合植物精油
随着人们对食品安全认识的提高以及抗生素在使用过程中出现的药物残留与细菌耐药性增强等负面因素，国家在严格控制动物生产中抗生素的种类与用量[1]。2020年7月1日我国已禁止向饲料中添加促生长类药物饲料添加剂。当前探索毒副作用小的抗生素替代物来减少抗生素的使用，甚至在养殖过程中做到无抗生素使用已经成为动物营养的热点，尤其是在肉鸡养殖领域。
菌酶复合物中有益菌能够在肠道内定殖并完成增殖，从而影响肠道内环境，而其中的各种复合酶能够在不同的肠道进行释放，作用于其他消化底物，提供动物对饲料中营养物质消化率[2]。丁酸作为一种短链脂肪酸，能够降低消化道pH值，增加肠道内蛋白酶活性，增加动物对饲料中营养物质利用率[3]。植物精油是从植物中提取的天然、挥发性和芳香性化合物的混合物，具有调节肠道菌群、提高动物免疫力和生产性能的作用[4]。
本试验为研究菌酶复合物与复合植物精油在817小型肉鸡生产中的使用效果，通过测定肉鸡生长性能、肠道酶活性、肠道菌群等相关指标，探讨在玉米-豆粕型817小型肉鸡无抗生素日粮基础上添加抗生素替代品的应用效果，为在动物生产中替抗与减抗提供科学理论依据与技术支持。
1 材料与方法
1.1 试验材料与动物分组
1.1.1 试验材料 抗生素选用亚甲基水杨酸杆菌肽：有效含量15%，添加量为每吨饲料添加200 g，购自成都思来生物科技有限公司。
菌酶复合物由青岛根源生物科技有限公司提供，主要为丁酸梭菌（2.3×107 CFU/g）、乳酸杆菌（1.9×107 CFU/g）、双歧杆菌（3.0×107 CFU/g）、枯草芽孢杆菌（1.6×108 CFU/g）、木聚糖酶（20000 U/g）、β-葡聚糖酶（15000 U/g）、β-甘露聚糖酶（4000 U/g）、纤维素酶（500 U/g）、果胶酶（2000 U/g）、蛋白酶（8000 U/g）和淀粉酶（3000 U/g），菌酶复合物在饲料中的添加量为250 mg/kg。
复合植物精油由丁酸钠（由杭州康德权饲料有限公司提供）与百里香酚（含量4.0%）、香芹酚（含量8.0%）、肉桂醛（含量4.0%）、丁香酚（含量2.0%）混合组成，复合植物精油在饲料中的添加量为250 mg/kg。
1.1.2 试验动物分组 试验选用800只817小型肉鸡，所用雏鸡为同一孵化场同一批次鸡苗，鸡舍内通风、光照、温度等管理程序一致。4个处理组，每个处理组200只817小型肉鸡。其中第1组作为对照组，饲喂含有亚甲基水杨酸杆菌肽的肉鸡饲料;第2组作为空白对照组，饲喂不含有任何药物的肉鸡饲料;第3组作为试验组Ⅰ组，饲喂只添加菌酶复合物的肉鸡饲料，剂量为250 mg/kg;第4组作为试验组Ⅱ组，饲喂只添加复合植物精油的肉鸡饲料，剂量为250 mg/kg。
1.2 试验日粮 817小型肉鸡日粮组成为玉米-豆粕型日粮，配方组成及营养水平见表1所示。
1.3 饲养管理 进雏鸡前，对鸡舍内的墙壁、地面以及饮食器具进行清洗消毒，然后对鸡舍和所有器具进行熏蒸消毒。试验鸡采用笼养，自由采食，采用暖风炉供暖。1～5 d房间温度控制在30～33 ℃，之后舍内温度每天以0.5 ℃逐渐下调，直到最终温度为21～23 ℃左右。饲养初期采用24 h光照，自第6天起，随着饲养日龄增加，每日减少光照时间0.5 h，到每日光照时间22 h后维持恒定，直至出鸡。每天对鸡舍进行清扫，定期清洗饮水管道，并及时通风换气，保证鸡舍内环境卫生良好。
1.4 测定指标和方法
1.4.1 生产性能与经济效益指标 记录整个试验过程中每组鸡的总饲料消耗量，同时记录每天鸡的死亡数量。42 d鸡只出栏时，记录出栏鸡的数量与重量，计算试验过程中料肉比及养殖期间死淘率。
料肉比（F/G）=平均日采食量/平均日增重×100%
死淘率=1-出栏鸡数/进鸡总数×100%
1.4.2 屠宰性能指标 第42天从各处理组中选取30只试验鸡先称重，随后进行胴体性状评定，方法参照中华人民共和国农业行业标准NY/T823-2004进行[3]，主要测定指标有屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。
1.4.3 血清指标 第42天，试验鸡屠宰过程中，收集血液10 mL，然后静置，待血液凝固之后用离心机离心10 min，分离血清，分装于1.0 mL离心管，使用生化分析仪分析血清中的葡萄糖、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白。 1.4.4 消化道淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性 在屠宰试验进行的同时，分别从腺胃、肌胃、十二指肠、空肠中分离相关食糜装入离心管中，冰箱冷冻，用于测定消化道酶活性。
消化酶样本前处理：冰冻的腺胃、肌胃、十二指肠和空肠的食糜，在室温下自然解冻，取少量食糜，加入双蒸水，按食糜质量（g）：水体积（mL）=1∶5，摇匀后置于4 ℃离心机3000 r/min离心5 min，取上清液测定蛋白酶活性。同时测定回肠内食糜的脂肪酶和蛋白酶活性，使用BCA方法测定上清液蛋白含量。
采用试剂盒测定酶活，试剂盒购自南京建成生物有限公司（具体步骤参考南京建成蛋白酶試剂盒说明书）。
1.4.5 肠道菌群变化 在屠宰试验进行的同时，分别从空肠和盲肠中分离相关食糜，冰箱冷冻，用于测定肠道菌群。
肠道菌群样品前处理：取出保存于-80 ℃冰箱的空肠和盲肠食糜样品，在无菌工作台上贴近肠壁取空肠、盲肠内容物0.5 g，加入灭菌生理盐水4.5 mL稀释成为10-1悬浊液，漩涡震荡3min，离心5 min，吸取0.5 mL上清液加入盛有4.5 mL灭菌生理盐水试管中稀释至10-2悬浊液，按照此方法再依次将空肠和盲肠内容物稀释至10-3、10-4、10-5、10-6、10-7用于涂板培养。
大肠杆菌计数：采用麦康凯培养基（MacConkey琼脂）采用37 ℃恒温培养箱培养24 h后通过平板计数法，菌落计数用lg（cfu/g）食糜表示。
乳酸杆菌计数：采用Rogasa琼脂培养基37 ℃恒温培养箱冲氮气进行厌氧培养24 h后通过平板计数法，菌落计数用lg（cfu/g）食糜表示。
1.5 数据分析 试验数据先用Microsoft Excel作初步处理，然后用SPSS17.0统计软件进行差异显著性检验，以P<0.05表示差异达到显著水平。
2 试验结果
2.1 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡生产性能的影响 结果见表2所示。
表2结果显示，使用菌酶复合物和复合植物精油能够减少817小型肉鸡养殖饲养过程中的死亡数，增加了肉鸡成活率，但效果要低于亚甲基水杨酸杆菌肽组;相比于空白组，使用菌酶复合物（试验Ⅰ组）和复合植物精油（试验Ⅱ组）均提高817小型肉鸡的生产性能，增加鸡只体重采食量，降低817小型肉鸡的料肉比，两个试验组相比较，复合植物精油组添加效果要略微好于菌酶复合物组，但两者之间差异不大（P>0.05）。
2.2 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡屠宰性能的影响 结果见表3所示。
表3结果显示：相比于对照组，空白处理组并未显著影响817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。相比于对照组与空白组，使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组并未显著影响817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率和肌胃重（P>0.05）。试验Ⅰ组和试验Ⅱ组之间对817小型肉鸡的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率、腿肌率和肌胃重无显著影响（P>0.05）。表3还显示，使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组有降低817小型肉鸡腹脂率的作用，但是两者之间差异不显著（P>0.05）。
2.3 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡血清指标的影响 结果见表4所示。
表4结果显示：与对照组相比，空白处理组对817小型肉鸡血清中的葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白无显著影响（P>0.05）;使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组对817小型肉鸡血清中的葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总蛋白和白蛋白无显著影响（P>0.05）;试验Ⅰ组和试验Ⅱ组两者对817小型肉鸡血清指标无显著影响（P>0.05）。相比于对照组和空白组，使用复合植物精油的试验Ⅱ组表现出降低血清中的总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的能力，但是试验Ⅰ组和试验Ⅱ组两者之间差异并不显著（P>0.05）。
2.4 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道酶活性的影响 结果见表5所示。
表5结果显示，空白组817小型肉鸡不同肠道的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活和空肠蛋白酶活比对照组低，回肠脂肪酶和回肠淀粉酶活性略高于对照组，但两者之间差异不显著（P>0.05）。菌酶复合物试验组能显著增加817小型肉鸡的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活、空肠蛋白酶活、回肠脂肪酶酶活和回肠淀粉酶酶活（P<0.05），复合植物精油虽能增加817小型肉鸡的肌胃蛋白酶活、腺胃蛋白酶活、十二指肠蛋白酶活、空肠蛋白酶活、回肠脂肪酶酶活和回肠淀粉酶酶活，但并未达到显著水平（P>0.05）。
2.5 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡肠道菌群的影响 结果见表6所示。
由表6可以看出，与对照组相比，空白组817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠大肠杆菌含量增加，但是两者之间差异不显著（P>0.05）;使用菌酶复合物和复合植物精油的试验组均能降低817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠内大肠杆菌含量，但差异不显著（P>0.05）;而试验Ⅰ组和试验Ⅱ组相比，在空肠、盲肠和直肠内大肠杆菌含量方面差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，空白组817小型肉鸡空肠、盲肠和直肠内乳酸杆菌含量增加，但是两者之间差异不显著（P>0.05）;相比于空白组，菌酶复合物试验组能够显著增加817小型肉鸡空肠盲肠和直肠内乳酸杆菌数量（P<0.05）;复合植物精油虽能够增加817小型肉鸡空肠盲肠和直肠内乳酸杆菌数量，但差异并不显著（P>0.05）;菌酶复合物处理组和复合植物精油处理组空肠、盲肠和直肠乳酸杆菌含量差异不显著（P>0.05）。 3 讨论
3.1 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡生产性能和屠宰性能的影响 付水光的研究[5]表明，复合酶制剂能够增加肉鸡的生长性能，表现为单日增重比对照组高4 g。李响研究[6]发现：益生菌（主要成分为枯草芽孢杆菌，有效含量为2.0×109 CFU/g）能够提高肉鸡的生长性能，酶制剂（主要成分是木聚糖酶和β-葡聚糖酶）能够提高肉鸡的生长性能。张杏莉的研究[7]结果表明，使用精油（1.7%的百里香酚与1.0%的香芹酚）能够提高肉鸡的生长性能与屠宰性能。张文静研究[8]指出，百里香酚、丁香酚、香芹酚、柠檬烯、柠檬醛、肉桂醛形成的复合植物精油能够增加肉鸡的生产性能。以上研究结论与本文的研究结果相一致，但是本文的结果显示，菌酶复合物和复合植物精油对于817小型肉鸡生长并未完全达到抗生素的作用效果。在屠宰性能方面，孙锡风等研究[9]结果表明，复合益生菌（主要成分为枯草芽孢杆菌和乳酸菌）对改善胸肌率和腿肌率有积极作用，这与本研究结果相一致，同时益生菌能够显著降低腹脂率，造成这种现象的原因可能与试验动物差异性或两种试验饲料中粗脂肪的含量存在差异有关。
3.2 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡血清指标的影响 在817小型肉鸡血清指标方面，许运岑的研究[10]表明，益生菌（主要成分是枯草芽孢杆菌）能够降低血清中的总胆固醇，而本研究结果表明益生菌降低血清的总胆固醇，但是没有达到显著水平，分析原因可能与益生菌的菌株差异与使用剂量差异有关。复合菌酶与复合植物精油降低血清中的总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白，可能与复合菌酶与复合植物精油提高817小型肉鸡整体健康情况有关，具体降低的机制还需要进一步研究。
3.3 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道酶活性的影响 肉鸡对饲料中营养物质的消化是借助于肠道内的消化酶完成的，因此外源性复合酶（淀粉酶、脂肪酶与蛋白酶）的添加能够增加肠道内淀粉酶、脂肪酶与蛋白酶的含量，从而增加消化性能[5，6]，这也与之前的研究结果相一致。而复合植物精油增加消化道内酶的活性，可能与肠道内环境的改善有关，因为丁酸钠具有改善肠道微生物组成、缓解炎症、提高免疫力以及促进肠道屏障功能[6]，植物精油具有增强抗菌免疫作用、维持肠道完整性、改善抗氧化性能的作用[4]，肠道功能的改善会增加消化酶的生成量，进而会增加消化道酶活，这与本文的研究结果相一致。另贾凤等的研究[3]亦表明，薄膜丁酸钠能够增加肉鸭消化道内消化酶活性。
3.4 菌酶复合物和复合植物精油对817小型肉鸡消化道菌群的影响 有研究指出外源性菌酶复合物的添加能够减少肉鸡肠道内有害微生物如大肠杆菌的数量，增加肉鸡肠道内有益微生物（如乳酸杆菌、双歧杆菌）[5]的数量，这与本文的研究结果相一致。丁酸钠的添加可以提高肠道健康，进而辅助提高817小型肉鸡肠道中有益菌的数量[3，6];复合植物精油增加817小型肉鸡肠道消化道菌群中有益菌的数量，可能与植物精油的缓解炎症和机体提高免疫力有关[4，7]，另外也可能与复合植物精油改善肉鸡肠道上皮屏障功能有关[11]，这些结论也与本文的研究结果相一致。具体微生物数量的变化还需要从微生物对肠道内环境变化的适应性以及微生物定殖等方面展开详细研究。
4 结论
外源性菌酶复合物和复合植物精油的添加能够提高817小型肉鸡的生产性能，提高肠道消化酶活性及改善肠道内环境，是在减抗替抗产品中较理想的选择。
参考文献：
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[2] 苗朝华，敖志刚，林伟忠.三黄鸡饲喂固态发酵多酶复合物的效果研究[J].饲料广角，2006（10）：49-50.
[3] 贾凤，刘燕，韦强，等.包膜丁酸钠对肉鸭肠道黏膜形态和消化酶活性的影响[J].浙江农业学报，2014，26（03）：570-575.
[4] 燕磊，朱正鹏，李星晨，等.植物精油在肉鸡生产中应用的研究进展[J].中國家禽，2017，39（06）：45-48.
[5] 付水广，李红美，吴华东.复合酶制剂对肉鸡生产性能的影响[J].江西畜牧兽医杂志，2019（01）：19-23.
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[7] 张杏莉.“精油+有机酸”微囊包被制剂在肉鸡生产中的应用研究[D].福州：福建农林大学，2016.
[8] 张文静.复合植物精油提高肉仔鸡生长性能和抗病力的初步研究与应用[D].长春：吉林大学，2017.
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[11] 杜恩存.百里香酚和香芹酚对肉仔鸡肠上皮屏障和免疫功能的调节作用[D].北京：中国农业大学，2016.
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