【摘 要】
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目的检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量,并探讨减少其残留量的方法。方法体外分离培养人骨髓基质干细胞,取第2代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱
【机 构】
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同济大学附属第十人民医院耳鼻咽喉头颈外科,同济大学附属第十人民医院整形外科,上海组织工程研究与开发中心
【基金项目】
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国家自然科学基金(81171475、31271027)
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目的检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量,并探讨减少其残留量的方法。方法体外分离培养人骨髓基质干细胞,取第2代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱导培养2周,体外构建组织工程骨。成骨诱导液为含10%胎牛血清的条件培养液,并于检测前1天更换为无血清的条件培养液。待测组织工程骨先经1:100(v:v)生理盐水浸洗3次,然后加入磷酸盐缓冲液(PBS),37℃振荡浸提24h,获取浸提液。同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液作为对照组。采用酶联免疫法检测样品浸提液中牛血清白蛋白的残余量,比较两者牛血清白蛋白残余量的差异。结果经生理盐水洗涤3次后,洗涤液中的牛血清白蛋白含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料的牛血清白蛋白残余量分别为(15.57±5.82)ng和(14.85±5.06)ng,单位重量的牛血清白蛋白残余量分别为(0.254±0.088)ng/mg和(0.306±0.079)ng/mg,两组相比均无显著性差异(P>0.05,n=10)。结论酶联免疫法适用于组织工程骨中牛血清白蛋白残余量的检测。因为支架材料较细胞更易吸附牛血清白蛋白,现有条件下构建的组织工程骨牛血清白蛋白残余量仍然较高,需要继续探索降低其残余含量的新方法。
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