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目的
建立应用流式细胞技术定量检测脑源性微粒(BDMP)含量的方法,观察其可靠性与稳定性,利用该方法探究颅脑创伤模型小鼠脑组织中BDMP的含量变化。
方法流式细胞仪检测3份荧光标准品的浓度,每次间隔2 h,连续测定5次,计算日内相对标准偏差(简称日内差);另取3份荧光标准品应用流式细胞仪检测其浓度,每次间隔24 h,连续测定5 d,计算日间相对标准偏差(简称日间差),依据日内差、日间差评价流式细胞仪的可靠性。提取小鼠脑源性微粒,利用流式细胞技术检测其浓度。
结果结果表明,3份荧光标准品的日内差分别为8.4%、5.4%、3.7%,平均值5.8%;3份荧光标准品的日间差分别为4.7%、5.8%、3.2%,平均值4.6%,均符合《中国药典》对生物样品检测相对标准偏差应小于15.0%的要求。应用流式细胞技术检测结果表明脑创伤小鼠脑组织中BDMP的总数为340 519.67±103 043.94,而健康小鼠脑组织BDMP总数为137 358.17±40 358.66,创伤组明显高于健康组(P=0.024)。
结论应用流式细胞仪技术定量检测BDMP是可靠的、稳定的。应用此方法初步证实,与假手术组比较,颅脑创伤可导致脑组织产生更多的BDMP。