淀粉样前体蛋白的原核表达、纯化及抗血清的制备和应用

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wangchun2000

【摘要】

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提取SH-SY5Y细胞的总RNA并合成单链cDNA,用PCR方法扩增出APP基因羧基端片段.测序后克隆至表达载体,在大肠杆菌M15中分别表达APP-C100和GST-APP-C100融合蛋白,纯化的GST-APP-C

【作者】

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石琦韩俊高晨李锋张宝云周玉玲董小平

【机构】

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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室,西安交通大学医学院

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2006年03期

【关键词】

：

淀粉样前体蛋白原核表达蛋白酶抗性多克隆抗体

【基金项目】

：

国家自然科学基金委重点项目(No.30130070);国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No.2001AA215391);欧盟项目(QLRT200001441)和国家科技攻关计划项目(No.2003BA712A04-02)资助~~

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提取SH-SY5Y细胞的总RNA并合成单链cDNA,用PCR方法扩增出APP基因羧基端片段.测序后克隆至表达载体,在大肠杆菌M15中分别表达APP-C100和GST-APP-C100融合蛋白,纯化的GST-APP-C100分子量约为38kD,APP-C100约为18kD,此外在APP-C100纯化产物中还存在有超过97kD的聚合物.体外蛋白酶消化实验显示纯化的GST-APP-C100和APP-C100单体对蛋白酶K消化敏感,而APP-C100聚合物具有抵抗蛋白酶消化能力.以GST-APP-C100免疫实验用兔后得到的APP抗血清经Western印迹鉴定可特异性识别重组及细胞内源性APP.

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