【摘 要】
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为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-N蛋白,通过间接ELISA
【机 构】
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中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学重点实验室; 华威特(北京)生物科技有限公司;
【基金项目】
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新吉林省科技发展计划项目(20150520125JH)资助
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为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-N蛋白,通过间接ELISA方法筛选到两株可以稳定分泌的N蛋白特异性单克隆抗体,命名为N-13、N-29。通过间接ELISA方法,WB与IFA方法对其进行鉴定,并测定其亲和常数。腹水效价分别为1:4 000与1:5 000,选择腹水效价高的N-13进行纯化标记,并对标记抗体的特异性、敏感性与保存期进行鉴定;通过DFA条件的摸索,建立了一种敏感的DFA诊断方法,并对其和PRRSV分离鉴定常用的CPE观察法进行比较。结果表明该DFA方法结果准确,可以作为实验室病毒分离鉴定和猪生产中该疾病诊断的有效手段。
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