目的:测定胸腺法新及其制剂中的杂质并对含量超过0.1%的杂质进行结构鉴定。方法:建立一种高效液相色谱法测定胸腺法新及其制剂中的杂质。含量超过ICH规定质控限度(0.1%)的杂质分别接取流分,脱盐富集之后使用MALDITOF/TOF质谱仪分析,推测其结构。合成杂质对照品后确证其结构,并进行杂质测定的方法学研究,测得各杂质相对于胸腺法新的校正因子。结果:通过对上市的多批胸腺法新及其制剂的分析可知,含量高于0.1%的杂质主要有4种。杂质1为胸腺法新肽序脱除第3个丙氨酸的多肽;杂质2为第1个丝氨酸右消旋化的多肽;杂质3为最后1个天冬酰胺右消旋化的多肽;杂质4为最后1个天冬酰胺水解为天冬氨酸的多肽。本法精密度、重复性、稳定性、耐用性好。杂质1、2、3、4在各自的线性范围内线性关系均良好(r≥0.9997),相对于胸腺法新的校正因子分别为0.98、1.06、1.24、1.30。杂质1、2、3、4的检测限分别为0.083、0.077、0.080、0.080μg·mL-1;定量限分别为0.25、0.23、0.24、0.24μg·mL-1;平均回收率分别为99.2%、100.0%、100.1%、98.8%,RSD分别为1.3%、1.2%、1.0%、0.90%(n=9)。结论:该方法可用于检查胸腺法新及其制剂中的杂质。