【摘 要】
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目的 研究外源性钙结合蛋白A8/A9 （S100A8/A9）通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌（OSCC）细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法 分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法（Western blot）检测β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-25 48 h后β-c
【基金项目】
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贵州省普通高等学校特色重点实验室（编号:黔教合KY字[2017]005）；
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目的 研究外源性钙结合蛋白A8/A9 （S100A8/A9）通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌（OSCC）细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法 分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法（Western blot）检测β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-25 48 h后β-catenin的表达;加入20μg/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1 （DKK-1）,Western blot和实时定量荧光PCR（qPCR）检测β-catenin的表达;采用Transwell实验比较正常对照组（Control组）、添加S100A8/A9蛋白组、加入DKK-1组、加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组的细胞侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞髓细胞瘤病毒癌基因（c-Myc）和细胞周期蛋白D（cyclinD1）的表达。结果 S100A8、A9能激活Wnt/β-catenin通路,与S100A8和S100A9分别培养相比,共同培养时CAL-27和SCC-25细胞中的β-catenin表达随着时间上调,qPCR结果与Western blot结果一致;在免疫荧光实验中,SCC-25及CAL-27细胞的细胞质和细胞核内均观察到β-catenin表达量变化,SCC-25及CAL-27细胞内β-catenin蛋白在48 h表达量增加（P ＜0.05）;加入DKK-1,Western blot和qPCR显示β-catenin的表达降低（P ＜0.001）;添加S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于Co ntrol组（P ＜0.001）,添加DKK-1抑制剂组细胞侵袭迁移数量减少,加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组细胞侵袭迁移数量减少,提示DKK-1能够抑制外源性S100A8/A9蛋白对SCC-25及CAL-27细胞的侵袭迁移能力的促进作用,差异有统计学意义（P ＜0.001）;加入Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1,Western blot实验显示Wnt/β-catenin通路关键分子c-Myc和cyclinD1的表达降低（P ＜0.001）。结论 外源性S100A8/A9蛋白可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进SCC-25和CAL-27细胞的侵袭和迁移。
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