观察双基因重组载体对乙醇作用下兔干细胞增殖与成骨活性的影响。
方法取第3代兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)，随机分为6组：(1)正常组：正常培养BMSCs，无基因转染；(2)模型组：无基因转染BMSCs；(3)无关序列组：10 μl无关序列载体转染BMSCs；(4)沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ(siPPARγ)组：10 μl siPPARγ基因载体转染BMSCs；(5)表达降钙素基因相关肽(exCGRP)组：10 μl CGRP基因载体转染BMSCs；(6)双基因组：10 μl双基因重组载体转染BMSCs。除正常组外，其余各组细胞给予终质量浓度0.09 mol/L乙醇。采用噻唑蓝(MTT)法检测BMSCs增殖，第14天检测各组细胞内碱性磷酸酶活性、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原、培养基中骨钙素含量，并作碱性磷酸酶(ALP)染色。
结果双基因组细胞增殖明显，增殖曲线接近于正常组。细胞中ALP活性、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原、培养基中骨钙素含量：双基因组数值最高，分别为(18.593±2.350) U/L、(24.422±3.110) ng/ml、(5.951±0.650) μg/L、(5.836±0.630) ng/ml，显著高于模型组[(6.528±0.830) U/L、(9.422±1.250) ng/ml、(1.733±0.230) μg/L、(2.016±0.240) ng/ml]、无关序列组[(7.011±0.850) U/L、(9.693±1.260) ng/ml、(1.663±0.220) μg/L、(1.913±0.230) ng/ml]，明显高于siPPARγ组[(13.536±1.710) U/L、(17.103±2.230) ng/ml、(3.486±0.410) μg/L、(3.686±0.420) ng/ml]、exCGRP组[(13.692±1.760) U/L、(17.185±2.240) ng/ml、(3.525±0.420) μg/L、(3.833±0.430) ng/ml]、正常组[(15.056±1.910) U/L、(18.528±2.430) ng/ml、(4.035±0.460) μg/L、(4.012±0.460) ng/ml]，差异均有统计学意义(均P＝0.000)。模型组、无关序列组数值显著低于正常组，差异均有统计学意义(均P＝0.000)。siPPARγ组、exCGRP组数值略低于正常组，差异均无统计学意义：ALP活性(P＝0.222、0.274)，层粘连蛋白(P＝0.362、0.390)，Ⅰ型胶原(P＝0.082、0.105)，骨钙素(P＝0.276、0.543)。双基因组数值显著高于正常组，差异有统计学意义：ALP活性(P＝0.031)，层粘连蛋白(P＝0.010)，Ⅰ型胶原、骨钙素(均P＝0.001)；且明显高于siPPARγ组、exCGRP组，差异均有统计学意义：ALP活性(P＝0.005、0.006)，层粘连蛋白(P＝0.003、0.003)，Ⅰ型胶原、骨钙素(均P＝0.000)。ALP染色显示：双基因组中大量细胞胞质染色为深蓝色，且较正常组多。
结论双基因重组载体可以保持乙醇作用下兔干细胞正常增殖，显著促进成骨活性，优于单一基因作用。