【摘 要】
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PCR法扩增rh Dll4基因片段,用EcoR I和Not I双酶切后克隆到真核载体p CA中,并对其进行双酶切和测序鉴定;用电转法将真核载体导入CHO细胞中,并利用Western blot法检测rh Dll4
【基金项目】
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中国药科大学中央高校基本科研专项基金资助项目(No.JKY2011025);国家自然科学基金资助项目(No.81273425)
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PCR法扩增rh Dll4基因片段,用EcoR I和Not I双酶切后克隆到真核载体p CA中,并对其进行双酶切和测序鉴定;用电转法将真核载体导入CHO细胞中,并利用Western blot法检测rh Dll4在CHO细胞中的表达水平。经双酶切和测序验证,成功构建p CA-rh Dll4真核表达载体。Western bolt验证表明,rh Dll4基因在CHO细胞中正常表达。经镍柱亲和层析纯化后,rh Dll4蛋白纯度达95%以上。MTT法检测,rh Dll4可以有效地抑制HUVEC增殖;同时可以促进Notch1受体的切割,表明所表达的rh Dll4蛋白具有生物学功能,为本实验下一步抗rh Dll4单克隆抗体的筛选奠定了基础。
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